辣椒材料的形態(tài)學(xué)和RAPD分析.pdf

1、本試驗(yàn)采用了28份辣椒材料，調(diào)查了第一開(kāi)花節(jié)位、平均株高、果長(zhǎng)、果徑、果肉厚和單果重6個(gè)植物學(xué)性狀，運(yùn)用CTAB法提取了材料的DNA，并對(duì)RAPD反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化，利用植物學(xué)性狀和RAPD技術(shù)對(duì)這28個(gè)材料進(jìn)行了聚類分析。主要結(jié)果如下： 1.利用改良CTAB法提取了材料的DNA，其OD260/OD280比值大多在1.8-2.0之間，OD260/OD230大于2，所提取的DNA含有較少的雜質(zhì)，符合RAPD的要求。 2.采

2、用單因素逐項(xiàng)優(yōu)化的方法，建立了RAPD優(yōu)化反應(yīng)體系為：20μl反應(yīng)體系中，Taq酶1.0U，dNTP0.2mmol/L，Mg2+2.0mmol/L，隨機(jī)引物0.2μmol/L，模板DNA80ng，10×PCRbuffer2.0μl，其余用ddH2O補(bǔ)足，最后加10μl礦物油覆蓋。擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4min，94℃變性1min，37℃退火1min，72℃延伸1.5min，40個(gè)循環(huán)，72℃延伸7min，4℃保存。 3.從38

3、個(gè)隨機(jī)引物中篩選出13個(gè)多態(tài)性好的隨機(jī)引物，用這13個(gè)引物對(duì)28個(gè)辣椒材料進(jìn)行擴(kuò)增，共擴(kuò)增出了157條帶，平均每條引物獲得12.1條，其中多態(tài)性帶128條，多態(tài)性比率為81.52％，平均每條引物獲得多態(tài)性帶9.9條。 4.形態(tài)學(xué)聚類結(jié)果把28份材料分為5類。第一類包括20號(hào)朝天椒-4、21號(hào)朝天椒-5、23號(hào)朝天椒-7、2號(hào)野山椒-1、22號(hào)朝天椒-6、26號(hào)山東七星、3號(hào)野山椒-2、4號(hào)紫色五彩椒、17號(hào)朝天椒-1、19號(hào)朝天

4、椒-3、24號(hào)朝天椒天米、18號(hào)朝天椒-2、8號(hào)二金條；第二類包括7號(hào)惠香、25號(hào)長(zhǎng)錐型紅彩椒、9號(hào)長(zhǎng)椒7＃、12號(hào)辣椒118＃、27號(hào)抗病一號(hào)、13號(hào)新紅、28號(hào)九香；第三類包括10號(hào)長(zhǎng)椒2-1、14號(hào)黃玉、16號(hào)勝利、15號(hào)東方，5號(hào)膠州長(zhǎng)辣椒、6號(hào)千惠；第四類為1號(hào)墨西哥；第六類為11號(hào)落椒98＃。 5.RAPD聚類結(jié)果：利用NTSYSpc軟件分析RAPD數(shù)據(jù)，在相似系數(shù)為0.780處把28份辣椒材料分為六大類。第一類為1

5、號(hào)墨西哥椒，是四川農(nóng)業(yè)大學(xué)引進(jìn)的國(guó)外品種；第二類包括16號(hào)勝利、7號(hào)惠香、13號(hào)新紅、14號(hào)黃玉、6號(hào)千惠、5號(hào)膠州長(zhǎng)辣椒、8號(hào)二金條、9號(hào)長(zhǎng)椒2-1、12號(hào)辣椒118＃、10號(hào)長(zhǎng)椒7＃；第三類為11號(hào)落椒98＃；第四類包括2號(hào)野山椒-1、4號(hào)紫色五彩椒、3號(hào)野山椒-2、15號(hào)東方這4份材料：第五類包括26號(hào)山東七星、22號(hào)朝天椒-6、21號(hào)朝天椒-5、24號(hào)朝天椒天米、25號(hào)長(zhǎng)錐形紅彩椒、20號(hào)朝天椒-3、23號(hào)朝天椒-7、17號(hào)朝天