辣椒遺傳多樣性的RAPD和ISSR分析.pdf

1、本試驗(yàn)采用30份辣椒種質(zhì)材料，調(diào)查了其平均株高、莖粗、第一開花節(jié)位、單果重、果長、果徑7個(gè)植物學(xué)性狀和果實(shí)特性，運(yùn)用改良CTAB法提取了辣椒種質(zhì)材料的基因組DNA，進(jìn)行了DNA質(zhì)量和純度的檢測，并利用正交設(shè)計(jì)對(duì)RAPD和ISSR的反應(yīng)體系進(jìn)行了優(yōu)化。用篩選出的12對(duì)RAPD引物和11對(duì)ISSR引物對(duì)基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增，并用NTSYS-pc(2.10)軟件對(duì)其遺傳多樣性進(jìn)行了聚類分析。得出的主要結(jié)果如下：
　　 1、通過對(duì)辣椒種

2、質(zhì)材料7個(gè)形態(tài)學(xué)性狀的測量，用SPSS11.5軟件將30份辣椒種質(zhì)材料分為了8大類。
　　 2、本試驗(yàn)利用改良CTAB法提取辣椒種質(zhì)材料的DNA，所提取的DNA質(zhì)量較好、純度較高。
　　 3、通過正交設(shè)計(jì)優(yōu)化建立了適合辣椒種質(zhì)材料分析的RAPD和ISSR反應(yīng)體系。RAPD最優(yōu)反應(yīng)體系總體積為20μL，其中10×PCRbuffer溶液2.0μL、25μmol/LMgCL2溶液1.5μL、2mmol/L的dNTPs溶液2.0

3、μL、10μmol/L隨機(jī)引物1.0μL、50ng/μL模板DNA1.0μL、2.5U/μL TaqDNA聚合酶0.4μL，并加20μL石蠟油覆蓋。PCR擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性3min;94℃變性60S，37℃復(fù)性90S，72℃延伸120S，35個(gè)循環(huán)；最后在72℃延伸10min。ISSR反應(yīng)體系總體積為20μL，其中10×PCR buffer溶液2.0μL、25μmol/L MgCl2溶液1.5μL、2mmol/L的dNTPs溶液2.

4、0μL、10μmol/L隨機(jī)引物1.0μL、50ng/μL模板DNA1.0μL、2.5U/μL TaqDNA聚合酶0.5μL，20μL石蠟油覆蓋。擴(kuò)增程序?yàn)?4℃預(yù)變性3min;94℃變性45S，48℃-56℃復(fù)性90S，72℃延伸120S，35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。
　　 4、用NTSYS-pc(2.10)軟件對(duì)30份辣椒種質(zhì)材料的RAPD和ISSR擴(kuò)增圖譜進(jìn)行聚類分析表明：用ISSR引物對(duì)辣椒種質(zhì)材料擴(kuò)增出的條帶