Elongator復(fù)合物在60Coγ射線誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞DNA損傷修復(fù)中的作用.pdf

1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名： 生! 塞! 嫠 日 期：翌鑒生f 2 ：E 1 0 n g a t o r 復(fù)合物在6

2、 0 c o ^ r 射線誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞D N A 損傷修復(fù)中的作用 中文摘要中文摘要目的：研究E 1 0 n g a t o r 復(fù)合物對(duì)6 0 C o7 射線輻照誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞D N A 損傷修復(fù)的影響，探討在肝癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中E 1 0 n g a t o r 對(duì)肝癌細(xì)胞基因組發(fā)揮保護(hù)作用的分子機(jī)制。方法：1 ．R T ．P C R 檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中內(nèi)源性e l p 3 和e l p 4m R N A 的表達(dá)量。2 ．以0 T M

3、 值為指標(biāo)，用彗星電泳檢測(cè)輻照后各組細(xì)胞的D N A 損傷程度。3 ．以Y —H 2 A X 為指標(biāo)，用免疫熒光法和w e s t e m b l o t 進(jìn)一步確認(rèn)輻照后各組細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)的D N A 損傷程度和蛋白表達(dá)變化情況。4 ．流式細(xì)胞儀檢測(cè)輻照后各組細(xì)胞的凋亡率。5 ．實(shí)時(shí)熒光定量P C R 檢測(cè)各組細(xì)胞中R A D 5 0 、M r e l l 、N b s l 、A T M 、A T R 、D N A P K ．c s

4、 、C h k l 、C h k 2 、X R C C 6 、B R C A l 、G A D D 4 5 G 和C D C 2 5 A 等損傷修復(fù)相關(guān)基因的表達(dá)水平。6 ．W e s t e m b l o t 檢測(cè)各組細(xì)胞中R A D 5 0 、M r e l l 和X R C C 6 等損傷修復(fù)相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：1 ．R T - P C R 檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，內(nèi)源性e l p 3 和e l p 4m I ⅢA 在不同腫瘤細(xì)胞株

5、中均有表達(dá)，但相對(duì)表達(dá)量并沒(méi)有顯著變化。2 ．彗星電泳檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組H 印G 2 ／S K —H ?。? 細(xì)胞組相比較，E l o n g a t o r 過(guò)表達(dá)組中O T M 值明顯減小，而E 1 0 n g a t o r 干擾組中0 T M 值明顯增加，從而說(shuō)明E 1 0 n g a t o r 復(fù)合物能夠減輕肝癌細(xì)胞D N A 損傷程度，對(duì)保護(hù)細(xì)胞D N A 免受6 0 C oY 射線輻照造成的損傷是非常關(guān)鍵的。3 ．免