HSP70—腫瘤肽復(fù)合物的純化及其對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG—2增殖作用的研究.pdf

1、目的：熱休克蛋白(heatshockprotein，HSP)是廣泛存在于生物界(從原核生物到真核生物)中具有高度保守性質(zhì)的蛋白質(zhì)。大量的研究表明HSP70在包括肝癌在內(nèi)的大多數(shù)的腫瘤中均有高表達(dá)。目前的研究表明，HSP70在許多腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞的保護(hù)、維持細(xì)胞的穩(wěn)定有重要的作用，而且在抑制腫瘤細(xì)胞調(diào)亡的過(guò)程中也發(fā)揮著重要的作用。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，源自腫瘤組織的HSP-腫瘤肽免疫宿主可激發(fā)持久的T細(xì)胞免疫，產(chǎn)生特異的抗腫瘤免疫

2、效應(yīng)。本試驗(yàn)的研究目的就是應(yīng)用快速蛋白液相色譜(FPLC)系統(tǒng)從肝癌組織中建立分離和純化HSP70-腫瘤肽復(fù)合物，并研究其對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG-2增殖的影響和其對(duì)HepG-2中JNK和c-Jun表達(dá)的影響。 方法：1.總蛋白的制備：應(yīng)用裂解液進(jìn)行勻漿，并高速離心。 2.HSP70-腫瘤肽復(fù)合物的純化：上述的總蛋白依次進(jìn)行ConA-Sepharose親和層析和DEAE-Sephacel離子交換層析分離純化。 3.H

3、SP70-腫瘤肽復(fù)合物的鑒定和濃度測(cè)定：所得蛋白經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和Westernblot進(jìn)行蛋白分子量及性質(zhì)鑒定，Bradford法測(cè)定蛋白濃度。 4.利用MTT方法檢測(cè)HSP70-腫瘤肽復(fù)合物對(duì)HepG-2細(xì)胞增長(zhǎng)的情況。 5.應(yīng)用Western-blot的方法檢測(cè)JNK，p-JNK，c-Jun，p-c-Jun表達(dá)的情況。 結(jié)果：1.分離、純化得到的蛋白經(jīng)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳、考馬斯量藍(lán)鑒定為

4、單一帶，分子量為70kD；Westernblot結(jié)果證實(shí)為HSP70。每10g組織最終獲得8mg的HSP70。 2.HSP70刺激組與對(duì)照組的OD值之間有顯著差異(p＜0.01)，細(xì)胞存活率明顯高于對(duì)照組。 3.JNK，p-JNK，c-Jun，p-c-Jun蛋白的表達(dá)，HSP70組低于對(duì)照組。 結(jié)論：1.使用ConA親和層析和陰離子交換蛋白親和層析二步蛋白純化法可獲得高純度HSP70肽復(fù)合物。 2.HSP