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1、目的:近年來(lái)有研究表明巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)在許多腫瘤中都有較高的表達(dá),并有可能參與腫瘤的血管生成、增殖和遷移。但其具體機(jī)制目前還未完全闡明。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察MIF抗體(MIF antibody)對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG-2增殖的影響,并探討其可能作用機(jī)制。 方法:四甲基偶氮唑鹽法檢測(cè)MIF抗體(50、100、200、400ug/L)對(duì)HepG-2細(xì)
2、胞增殖的抑制作用;流式細(xì)胞儀檢測(cè)MIF抗體作用HepG-2細(xì)胞48h后細(xì)胞周期的變化;免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)MIF抗體對(duì)CyclinD1蛋白表達(dá)的影響;蛋白印跡(western-blot)法檢測(cè)MIF抗體對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表達(dá)的影響;ELISA法檢測(cè)MIF抗體對(duì)HepG-2細(xì)胞分泌釋放白介素-6(interleukin-6,IL-6)濃度的影響。
3、 結(jié)果:MIF抗體可以抑制肝癌細(xì)胞HepG2生長(zhǎng)并具有劑量和時(shí)間依賴性。MIF抗體可使細(xì)胞周期停滯于G0/G1期,不同濃度(50、100、200、400μg/L)MIF抗體作用48h后,G0/G1期細(xì)胞比例分別為61.34%±1.08%、65.08%±2.71%、71.19%±1.19%、78.39%±1.00%、83.92%±0.51%。不同濃度MIF抗體作用后CyclinD1蛋白表達(dá)率分別為26.06%±0.47%、22.34%±0
4、.75%、18.06%±1.16%、14.03%±0.59%,明顯低于對(duì)照組(29.51%±1.28%)。不同濃度MIF抗體作用后VEGF蛋白表達(dá)分別為21.22%±0.68%、19.64%±0.54%、18.04%±0.42%、16.59%±0.66%,明顯低于對(duì)照組(23.23%±0.51%)。MIF抗體對(duì)HepG-2細(xì)胞分泌IL-6有抑制作用,隨著MIF抗體濃度的增加,其IL-6分泌量也相應(yīng)降低,分別為(210.67±9.31)p
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