藤黃酸-聚乳酸納米粒的研制及其對肝癌細胞HepG2的體外抑制作用.pdf

1、目的:藤黃酸(GambogicAcid，GA)是目前較好的抗腫瘤藥物之一，對多種癌癥均有較明顯的治療作用，在臨床上已得到了應用。但其水溶性極差(溶解度小于0.002g/ml)，為了增加其溶解性，本文采用生物降解材料聚乳酸制備了藤黃酸．聚乳酸納米粒(GA-PLA-NPs)并對其性能及作用進行了初步研究。 方法:本文采用自乳化溶劑揮發(fā)法制備GA-PLA-NPs，單因素及多因素實驗考察制備過程中各因素對納米粒的粒徑及質量的影響及其規(guī)律

2、，紫外分光光度法檢測藥物含量；透射電子顯微鏡(TEM)觀察納米粒的形態(tài)，激光粒度分析儀測定其平均粒徑大小、多分散系數(shù)及分布，超速離心后紫外分光光度計測定納米粒的包封率、載藥量及回收率，考察了納米粒的穩(wěn)定性及體外釋放特性；對其安全性進行了了初步評價。以人肝癌細胞株HepG2為研究對象，采用MTT比色實驗法，檢測不同濃度的GA和GA-PLA-NPs對肝癌細胞HepG2生長增殖的影響，生長曲線測定藥物對細胞增殖的影響，HE染色和相差顯微鏡觀察

3、各組細胞的形態(tài)學變化。 結果:制備的GA-PLA-NPs澄清、透明，質量穩(wěn)定；所建立的測定GA-PLA-NPs溶液中GA濃度的紫外分光光度法方法準確可靠，進樣重復性、日內及日間精密度的相對標準偏差均小于0.6％，能滿足GA-PLA-NPs制備工藝研究中包封率、載藥量及回收率等指標檢測的需要。通過單因素考察，發(fā)現(xiàn)表面活性劑、有機相、攪拌速度、攪拌時間及蒸發(fā)溫度、聚乳酸的濃度、表面活性劑濃度、水相與油相體積比、藤黃酸的濃度對GA-P

4、LA-NPs的制備有一定的影響，水相體積的增大、聚乳酸濃度的增大均使GA-PLA-NPs的粒徑增大。另外表面活性劑的濃度也對GA-PLA-NPs的粒徑及度分散系數(shù)有一定的影響。多因素實驗中，通過均勻設計實驗考察了藤黃酸與聚乳酸的質量比(GA：PLA)、聚乳酸在水相中的濃度(PLA：水相/g/20mL)及有機相與水相的體積比(有機相：水相)等因素對粒徑及多分散系數(shù)的影響及其影響規(guī)律，優(yōu)化實驗結果顯示，制備的優(yōu)化處方為：藤黃酸與聚乳酸的質量

5、比為1：6；聚乳酸在水相中的濃度為70g/20mL水相；有機相與水相的體積比為1：1。 所制備的PLA．NPs在電鏡下觀察成球型，形態(tài)規(guī)則完整，較均勻，GA以吸附或鑲嵌的形式附著在聚乳酸納米粒的表面；平均粒徑為51.2nm，有95％以上的粒徑分布于30～70 nm之間，粒徑分布范圍較窄，粒徑大小均勻，經高速離心，計算得出GA-PLA-NPs的平均包封率為98.87％，平均載藥量為13.3％；測定得出平均回收率>99％，RSD為3

6、.37％；制備的GA-PLA-NPs的穩(wěn)定性良好，具有加速、熱、光及長期穩(wěn)定性；制備的GA-PLA-NPs的體外釋藥存在兩相，前5 h處于突釋期，藤黃酸在此階段累積釋放量達30％，此后進入緩釋期，24 h后累積釋放量達51％。所制備的GA-PLA-NPs的LDso為26.605 mg/kg。比GA原料藥的LDso(20.000mg/Kg)大。體外藥敏試驗顯示，與對照組比較，100μg/mLPLA-NPs實驗組對細胞沒有抑制作用，GA原料