天力克和莪術(shù)油對肝癌細(xì)胞株HepG-2抗腫瘤機(jī)制的比較研究.pdf

1、目的：研究比較中藥復(fù)方制劑天力克、單藥莪術(shù)揮發(fā)油及5-Fu體外對人肝癌細(xì)胞株HepG-2抗腫瘤作用及其機(jī)制的異同。 方法 采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，光鏡、熒光顯微鏡及透射電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化、MTT 法觀察細(xì)胞生長抑制作用、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及周期變化，Hoechst 33258染色試劑染色觀察藥物處理肝癌HepG-2細(xì)胞后的形態(tài)變化，凱基TRAP-銀染法研究藥物處理肝癌HepG-2細(xì)胞后，端粒酶活性的表達(dá)及免疫細(xì)胞化學(xué)

2、技術(shù)研究藥物處理肝癌HepG-2細(xì)胞后，survivin、NF-кB蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果 MTT法證實(shí)莪術(shù)揮發(fā)油對肝癌HepG-2細(xì)胞有明顯的抑制作用，且有明顯的濃度一時(shí)間依賴性；天力克對肝癌HepG-2細(xì)胞未顯示出抑制作用。鏡下觀察天力克對人肝癌細(xì)胞的作用主要是導(dǎo)致細(xì)胞漿空泡變性，莪術(shù)揮發(fā)油作用后可見細(xì)胞出現(xiàn)典型凋亡細(xì)胞形態(tài)改變：細(xì)胞染色質(zhì)濃縮，聚集于核邊緣形成塊狀或新月狀；細(xì)胞體積縮小，核固縮濃染，細(xì)胞出泡、凋亡小

3、體形成。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示天力克、莪術(shù)油和5-Fu作用后，S期細(xì)胞比例增高，以天力克作用為最強(qiáng)(P<0.01)。莪術(shù)油組與5-Fu組作用相近，且可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡與天力克組、陰性對照組比較有顯著性差異(P<0.05)：AV/PI染色后流式細(xì)胞儀檢測顯示天力克作用細(xì)胞后出現(xiàn)磷脂酰絲氨酸 (phosphatidyl—serine，PS)的膜外翻，未出現(xiàn)晚期凋亡；莪術(shù)油、5-Fu作用細(xì)胞后出現(xiàn)細(xì)胞凋亡，并且莪術(shù)油可直接導(dǎo)致細(xì)胞壞死，與陰性對照

4、組、天力克組、5-Fu組比較差異有顯著性(P<0.05)。免疫組化示天力克組、莪術(shù)油組和5-Fu組Survivin蛋白及NF-кBp65的表達(dá)均下調(diào)(P<0.05)。天力克組下調(diào)survivin蛋白最為明顯(P<0.01)；凱基TRAP-銀染法研究莪術(shù)油作用細(xì)胞24h后，莪術(shù)油組、天力克組及5-Fu組端粒酶活性均降低，天力克組作用最明顯與莪術(shù)油組、5-Fu組比較有顯著性差別(p<0.05)。 結(jié)論 天力克主要抑制細(xì)胞增殖