尿酸、尿素對(duì)HK2-細(xì)胞凋亡、纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響及前列地爾的干預(yù)研究.pdf

1、第一部分尿酸對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞的凋亡、纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響及PGE1干預(yù)的體外研究
　　 目的:研究尿酸對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞凋亡、纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響以及PGE1的干預(yù)作用。
　　 方法:①培養(yǎng)HK-2細(xì)胞;②不同濃度的尿酸刺激HK-2細(xì)胞24h、48h、72h,用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性抑制率;不同濃度尿酸培養(yǎng)HK-2細(xì)胞24h,用Annexin V.FITC/PI流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡及檢測(cè)NAG酶的釋放量,來(lái)觀察尿

2、酸對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性作用;通過(guò)Western Blot和Real-Time PCR檢測(cè)TGF-β1、CTGF、FN的表達(dá),觀察尿酸對(duì)HK-2細(xì)胞的促纖維化作用;并加入PGE1了解其對(duì)HK-2細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果:①HK-2細(xì)胞加入不同濃度的尿酸分別作用24h、48h、72h后,與對(duì)照組比較,細(xì)胞活性抑制率明顯升高,并呈時(shí)間劑量依賴性。尿酸作用HK-2細(xì)胞24h后,與對(duì)照組比較,細(xì)胞凋亡率呈劑量依賴性增加至56.06％±

3、4.937％,NAG酶釋放量也呈劑量依賴性增加至15.23±0.617。800umol/L尿酸組加入PGE1后,與800umol/L尿酸組比較,細(xì)胞活性抑制率下降明顯,細(xì)胞凋亡率也明顯降低至41.61％±4.149％,NAG酶釋放量明顯減少至11.24±0.468。②.用不同濃度的尿酸作用HK-2細(xì)胞24h后,用Western Blot和Real-Time PCR檢測(cè)TGF-β1、CTGF、FN的表達(dá),與對(duì)照組比較,TGF-β1、CTG

4、F、FN的表達(dá)量均明顯增加,并呈劑量依賴性。加入PGE1后,與單純尿酸組比較,TGF-β1、CTGF、FN表達(dá)量下降明顯。
　　 結(jié)論:①尿酸抑制HK-2細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡,增加NAG酶的釋放;②尿酸促HK-2細(xì)胞纖維化相關(guān)因子的表達(dá);③PGE1能降低尿酸所致HK-2細(xì)胞凋亡,降低尿酸誘導(dǎo)纖維化相關(guān)因子在HK-2細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 第二部分尿素對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞的凋亡、纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響及PGE1干預(yù)的體外研究<

5、br>　　 目的:研究尿素對(duì)人腎小管上皮細(xì)胞的凋亡、纖維化相關(guān)因子表達(dá)的影響以及PGE1的干預(yù)作用。
　　 方法:①.培養(yǎng)HK-2細(xì)胞;②.不同濃度的尿素刺激HK-2細(xì)胞24h、48h、72h,用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活性抑制率;用不同濃度尿素培養(yǎng)HK-2細(xì)胞24h,檢測(cè)NAG酶的釋放量及Annexin V.FITC/PI流式細(xì)胞檢測(cè)凋亡來(lái)觀察尿素對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性作用;通過(guò)Western Blot和Real-Time PCR

6、檢測(cè)TGF-β1、CTGF、FN的表達(dá),觀察尿素對(duì)HK-2細(xì)胞的促纖維化作用;并加入PGE1了解其對(duì)HK-2細(xì)胞的保護(hù)作用。
　　 結(jié)果:①.HK-2細(xì)胞加入不同濃度的尿素分別作用24h、48h、72h后,與對(duì)照組比較,細(xì)胞活性抑制率明顯升高,呈劑量依賴性。尿素作用HK-2細(xì)胞24h后,與對(duì)照組比較,NAG酶釋放量呈劑量依賴性增加至14.23±0.750,細(xì)胞凋亡率也呈劑量依賴性增加至42.97％±3.012％;160mmol/

7、L尿素組加入PGE1后,與160mmol/L尿素組比較,細(xì)胞活性抑制率下降明顯,NAG酶釋放量明顯減少至10.603±0.698,細(xì)胞凋亡率也明顯降低至35.31％±2.308％,均有顯著性差異;②.用不同濃度的尿素作用HK-2細(xì)胞24h后,用WesternBlot和Real-Time PCR檢測(cè)TGF-β1、CTGF、FN的表達(dá),與對(duì)照組比較,TGF-β1、CTGF、FN的表達(dá)量均明顯增加,并呈劑量依賴性。加入PGE1后,與單純尿素組