全饑餓對(duì)腦皮質(zhì)細(xì)胞凋亡及相關(guān)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究全饑餓狀態(tài)對(duì)大腦皮層細(xì)胞凋亡及其相關(guān)因子Bcl-2，Bax，Caspase-3的表達(dá)影響。
　　方法:成年雄性SD大鼠，健康清潔級(jí)90只，350±30g，隨機(jī)分為6組（每組15只）：正常對(duì)照組（即正常進(jìn)食組），饑餓組為五組即3d組、5d組、7d組、9d組、11d組。其后又將每一組隨機(jī)分為三個(gè)亞組I、II、III組，每一個(gè)亞組5只。其中每一組I組應(yīng)用蘇木素-伊紅染色法觀(guān)測(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)變化，采用TUNEL法檢測(cè)凋

2、亡細(xì)胞，然后利用圖像分析儀來(lái)計(jì)算凋亡細(xì)胞表達(dá)數(shù)和凋亡指數(shù)，以此推測(cè)全饑餓狀態(tài)下大腦功能的變化。II組大鼠皮質(zhì)區(qū) Bcl-2、Bax、Caspase-3三種因子表達(dá)的信使核糖核酸及蛋白，其表達(dá)情況利用逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)和免疫印跡試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)觀(guān)察，以研究急性全饑餓對(duì)大鼠腦皮質(zhì)區(qū)凋亡相關(guān)因子的影響。III組大鼠在不同饑餓時(shí)限時(shí)腦組織含水量變化利用干濕重比法來(lái)檢測(cè)觀(guān)察，以便我們了解在這種情況下腦組織是否存在脫水情況。
　　結(jié)果:
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3、.大鼠一般行為觀(guān)察饑餓3d和饑餓5d組大鼠的一般狀態(tài)良好，饑餓后期即饑餓7d、9d、11d組，大鼠的一般狀況極度變差，精神狀態(tài)較萎靡，對(duì)刺激反應(yīng)遲鈍。
　　2.大鼠重量的變化饑餓前，各組大鼠之間對(duì)其機(jī)體重量進(jìn)行兩兩對(duì)比，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。隨著饑餓時(shí)間的增加，大鼠的體重不斷減輕。
　　3.皮質(zhì)區(qū)HE染色形態(tài)學(xué)比較結(jié)果光鏡下（×400）組織形態(tài)觀(guān)察可見(jiàn)：正常對(duì)照組、饑餓3d組和饑餓5d組大鼠皮質(zhì)區(qū)的細(xì)胞清晰飽滿(mǎn)，形

4、態(tài)完整，分布緊密規(guī)則，細(xì)胞質(zhì)染色深，分布均勻，細(xì)胞核居中，有明顯大量的神經(jīng)纖維。隨著饑餓時(shí)間的延長(zhǎng)，饑餓7d、9d、11d組大鼠皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞排列極其稀疏紊亂，細(xì)胞線(xiàn)不清，細(xì)胞間隙增寬，間質(zhì)水腫疏松，神經(jīng)細(xì)胞丟失、細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，尼氏體減少，細(xì)胞質(zhì)染色淡，細(xì)胞壞死增多。
　　4.皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞凋亡的檢測(cè)結(jié)果與正常對(duì)照組相比，皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞百分率，饑餓3d組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；饑餓5d組稍有增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而饑

5、餓后期7d、9d、11d組凋亡細(xì)胞百分比增加有顯著差異（P＜0.01）。說(shuō)明在饑餓早期，即饑餓3d時(shí)，大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡較少，饑餓5d組略有增加，而在饑餓后期，即饑餓7d、9d、11d時(shí)，大鼠皮質(zhì)區(qū)凋亡細(xì)胞的數(shù)目明顯增多。
　　5.逆轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)檢測(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下，三種凋亡相關(guān)因子其mRNA的表達(dá)結(jié)果與實(shí)驗(yàn)正常對(duì)照組相比，饑餓3d組Bax、Caspase-3 mRNA表達(dá)無(wú)明顯增高（P＞0.05），而饑餓5d、7d

6、、9d、11d組Bax mRNA、Caspase-3 mRNA表達(dá)均顯著增加(P＜0.01)；饑餓3d、5d、7d組Bcl-2 mRNA的表達(dá)均增高（P＜0.05），5d組表達(dá)量最高（P＜0.01），9d、11d組表達(dá)降低（P＜0.05），11d組表達(dá)量最低（P＜0.01）。
　　6.免疫印跡試驗(yàn)檢測(cè)大腦皮質(zhì)區(qū)在全饑餓狀態(tài)下，三種凋亡相關(guān)因子其蛋白的表達(dá)結(jié)果與對(duì)照組相比，饑餓3d組Bax蛋白、Caspase-3蛋白表達(dá)無(wú)增加（P＞

7、0.05），饑餓5d組Caspase-3蛋白表達(dá)增加（P＜0.05），Bax蛋白表達(dá)明顯增多（P＜0.01），饑餓后期組7d、9d、11d組Bax蛋白和Caspase-3蛋白表達(dá)均顯著增加（P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；饑餓3d、5d、7d組Bcl-2蛋白的表達(dá)均明顯增高（P＜0.01），5d組表達(dá)量最高，9d、11d組表達(dá)降低，11d組表達(dá)量最低（P＜0.01）。
　　7.干濕比重法各饑餓組的腦組織含水量與正常對(duì)照組相比，3

8、d組增加不明顯（P＞0.05），5d組明顯增加（P＜0.01），饑餓后期（7d、9d、11d）組均下降（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1.全饑餓狀態(tài)下大鼠皮質(zhì)區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡增加從饑餓第5d開(kāi)始存在。
　　2.在全饑餓狀態(tài)下，短期饑餓應(yīng)激可能有一定的腦保護(hù)作用，而長(zhǎng)期饑餓應(yīng)激引起大量皮質(zhì)細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腦功能受損，應(yīng)積極的預(yù)防和治療。
　　3.在全饑餓狀態(tài)下，Bcl-2、Bax、Caspase-3因子在凋亡調(diào)控中