轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在小鼠心肌肥大中的表達(dá)及雷公藤甲素的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、心肌肥大是高血壓、冠心病、慢性心衰等多種心血管疾病的共同生理病理過(guò)程，同時(shí)也是心血管類(lèi)疾病的高發(fā)病率和高死亡率的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，因此心肌肥大在心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到至關(guān)重要的作用，所以通過(guò)預(yù)防和逆轉(zhuǎn)心室肥厚與擴(kuò)張，阻滯心肌肥大，從而改善高血壓病人的預(yù)后，改善心衰患者的生活質(zhì)量，大幅度降低心血管疾病的致殘率和死亡率。
　　心肌肥大的發(fā)病機(jī)理除傳統(tǒng)的神經(jīng)-內(nèi)分泌因素外，還與細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡和炎癥免疫反應(yīng)異常密切相關(guān)。叉頭框轉(zhuǎn)錄因

2、子(forkhead box transcription factor，F(xiàn)ox)家族在心肌細(xì)胞的增殖分化與功能調(diào)控中發(fā)揮重要作用，F(xiàn)oxp3能抑制免疫細(xì)胞的活化并阻滯其向心肌組織遷移，減少心臟間質(zhì)的炎細(xì)胞浸潤(rùn)和細(xì)胞因子分泌，改善血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)或高血壓所致的心肌損害和隨后發(fā)生的心肌肥大。
　　雷公藤甲素(triptolide，TP)是祖國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)藥雷公藤屬植物根部提取物，多用于自身免疫性疾病的治療

3、，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其在抗炎、免疫調(diào)節(jié)等方面具有廣泛生物學(xué)活性，通過(guò)影響Foxp3在T細(xì)胞中的表達(dá)，使調(diào)節(jié)性T細(xì)胞發(fā)揮抑制免疫細(xì)胞產(chǎn)生和免疫應(yīng)答反應(yīng)。本研究旨在觀察轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在小鼠心肌肥大發(fā)生發(fā)展過(guò)程的表達(dá)變化及雷公藤甲素的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:
　　1.動(dòng)物分組及模型建立;按隨機(jī)原則將小鼠分為5組:分別為正常對(duì)照組、心肌肥大模型組、雷公藤甲素低、中、高劑量(10、30、90μg/kg)組(n=10)。雷公藤甲素組和模型

4、組小鼠背部皮下注射鹽酸異丙腎上腺素(isoprenaline，ISO)5mg/(kg·d)，每日一次，連續(xù)14d。對(duì)照組給與注射等體積的生理鹽水(normal saline，NS)。雷公藤甲素藥物組小鼠在注射ISO的同時(shí)，腹腔注射TP，每日1次，連續(xù)14d。
　　2.觀察小鼠的生存情況和心臟指數(shù);所有實(shí)驗(yàn)中小鼠每隔三天稱(chēng)量體重一次，并依據(jù)體重的增減變化來(lái)調(diào)整雷公藤甲素、ISO的用藥劑量。末次給藥后，稱(chēng)重法測(cè)定全心質(zhì)量(mg)、左心

5、室質(zhì)量(mg)，測(cè)量脛骨長(zhǎng)度值(mm)，計(jì)算心臟重量/體重、左心室重量/體重和左心室重量/脛骨長(zhǎng)度比值。
　　3.HE染色，光鏡下觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)改變，用ELISA法（酶聯(lián)免疫分析法）測(cè)定血清BNP含量，化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清肌鈣蛋白Ⅰ含量。
　　4.熒光定量PCR法檢測(cè)α-MHC mRNA、β-MHC mRNA、Foxp3 mRNA、CD4mRNA的表達(dá)水平。免疫熒光法檢測(cè)左心室TGF-β1、Foxp3蛋白的表達(dá)情況。免

6、疫組化法檢測(cè)α-MHC、β-MHC蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.對(duì)照組小鼠皮毛光順，行為敏捷，進(jìn)食飲水自如;異丙腎上腺素所致模型組的小鼠出現(xiàn)毛發(fā)無(wú)光澤，行為遲鈍，呼吸快而短促，病理檢查可見(jiàn)明顯的心肌損傷，心臟指數(shù)和左心室指數(shù)明顯升高。
　　2.對(duì)照組小鼠左心室心肌組織Foxp3和CD4表達(dá)豐富，而模型組則顯著減少;TGFβ1的表達(dá)情況與二者相反，在對(duì)照組弱表達(dá)，而模型組表達(dá)明顯增多。
　　3.雷公藤甲素治療組

7、小鼠活動(dòng)基本自如，體重增長(zhǎng)快，體重與對(duì)照組持平;顯著改善異丙腎上腺素所致的小鼠心肌肥大，減少心肌受損程度。雷公藤甲素(30、90μg/kg)能顯著增加心肌肥大小鼠左心室α-MHC表達(dá)，明顯下調(diào)β-MHC的表達(dá)，降低血清中BNP、肌鈣蛋白Ⅰ的含量。
　　4.雷公藤甲素(30、90μg/kg)能顯著增加心肌肥大小鼠心肌組織Foxp3、CD4mRNA及其蛋白表達(dá)，顯著降低TGFβ1表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.不引起明顯不良反