十全大補(bǔ)湯總多糖成分抑瘤和免疫調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：為了研究十全大補(bǔ)湯總多糖成分的體內(nèi)外抗腫瘤作用及作用機(jī)制，為十全大補(bǔ)湯的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.體外實(shí)驗(yàn)：提取十全大補(bǔ)湯總多糖，制備大鼠含藥血清。
　　1.1將1×105/ml H22細(xì)胞接種在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔100μL，分別加入10％、20%和40%濃度的含藥血清，并以正常大鼠血清作為對(duì)照，檢測(cè)培養(yǎng)后24h、48h、72h的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；
　　1.2無(wú)菌操作取小鼠脾臟細(xì)胞，調(diào)

2、整細(xì)胞濃度2×106個(gè)/ml，加入96孔培養(yǎng)板，每孔90μL，加入不同濃度的多糖含藥血清，分別為：10%、20%和40%濃度，檢測(cè)含藥血清對(duì)脾細(xì)胞增殖的影響；另取24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，加入上述脾細(xì)胞懸液，每孔1mL，分別加入不同濃度的多糖含藥血清，培養(yǎng)24h后離心取上清，用ELISA法，按試劑盒說(shuō)明檢測(cè)IL-2，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算IL-2含量。
　　2.體內(nèi)試驗(yàn)
　　分別取0.2ml5×106個(gè)/ml的H22細(xì)胞，接種于小鼠右側(cè)腋

3、窩皮下，建成實(shí)體型荷瘤鼠模型，24h后隨機(jī)分為五組，即模型對(duì)照組、順鉑（1mg/kg）組、順鉑聯(lián)合高（168.4mg.ml-1）、中（84.2 mg.ml-1）、低（42.1mg.ml-1）劑量十全大補(bǔ)湯總多糖組。十全大補(bǔ)湯總多糖采取灌胃給藥，0.5ml/只，1次/d，10d后眼球放血處死小鼠，稱取體重和瘤重，計(jì)算抑瘤率；分離血清，并分別制備腫瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞儀檢測(cè)腫瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞的凋亡；ELISA法檢測(cè)血清中IL-2、IF

4、N-γ和TNF-α含量。
　　結(jié)果：
　　1.不同濃度的十全大補(bǔ)湯總多糖大鼠含藥血清對(duì)H22細(xì)胞的增殖有一定抑制作用，且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率明顯增加，在作用的72h最高；
　　2.48h和72h的10%含藥血清、20%含藥血清、40%含藥血清的劑量組刺激小鼠脾細(xì)胞分泌的IL-2比對(duì)照組明顯增多，以40%含藥血清組最強(qiáng)；
　　3.順鉑聯(lián)合各劑量十全大補(bǔ)湯總多糖組小鼠體重均高于順鉑組，而順鉑聯(lián)合中、高劑量多糖組

5、的瘤重均低于順鉑組；
　　4.順鉑聯(lián)合各劑量十全大補(bǔ)湯總多糖組腫瘤細(xì)胞的凋亡率明高于順鉑組，而脾細(xì)胞的凋亡率均明顯又低于順鉑組；
　　5.順鉑聯(lián)合各劑量十全大補(bǔ)湯總多糖組荷瘤小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌水平均明顯高于順鉑組。
　　結(jié)論：
　　1.十全大補(bǔ)湯總多糖含藥血清在體外可明顯抑制H22肝癌細(xì)胞的增殖；并可促進(jìn)脾細(xì)胞增殖及IL-2的分泌，呈劑量依賴性；
　　2.十全大補(bǔ)湯總多糖可促進(jìn)