VEGF啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的雙自殺基因靶向治療乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文VEGF啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的雙自殺基因靶向治療乳腺癌的實(shí)驗(yàn)研究姓名：孔恒申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：普通外科指導(dǎo)教師：黃宗海20080416中文摘要療方法。本課題組近年來一直從事腫瘤自殺基因治療的研究，從單自殺基因到雙自殺基因，再到聯(lián)合使用腫瘤特異性調(diào)控元件增加靶向性，逐漸優(yōu)化自殺基因系統(tǒng)，并于胃腸道腫瘤中得到了很好的效果。本項(xiàng)目擬應(yīng)用VEGF啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)時(shí)CDfrK雙自殺基因系統(tǒng)對乳腺癌細(xì)胞MCF7的作用研究，觀察該系統(tǒng)在乳

2、腺癌中的應(yīng)用效果，為進(jìn)一步開展自殺基因靶向治療乳腺癌的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究內(nèi)容和結(jié)果‘第—部分：重組VEGFPLcD，rK基因的重組腺病毒擴(kuò)增和鑒定目的：在293細(xì)胞中擴(kuò)增攜帶VEGFPCD／TK基因的重組腺病毒，鑒定、純化并測定其感染復(fù)數(shù)、病毒滴度。方法：采用脂質(zhì)體法將質(zhì)粒pAdEasyVEGFPCD／TK轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞HEK293，用電鏡和PCR法鑒定重組腺病毒的轉(zhuǎn)染和目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)。根據(jù)CPE現(xiàn)象測定包裝病毒的感染復(fù)數(shù)，以此為基礎(chǔ)反

3、復(fù)感染293細(xì)胞以擴(kuò)增腺病毒，再用cscl密度梯度離心法純化之，用終點(diǎn)稀釋法測定病毒滴度。結(jié)果：復(fù)制缺陷型腺病毒在293細(xì)胞中成功包裝和擴(kuò)增，在熒光顯微鏡下可見綠色熒光表達(dá)。透射電鏡可見293細(xì)胞中蜂窩狀的病毒顆粒，PCR產(chǎn)物瓊脂糖電泳時(shí)，重組腺病毒出現(xiàn)2條帶，大小分別為2400bp和296bp，即為CD／TK和VEGFP，符合預(yù)期結(jié)果。Cscl密度梯度離心法純化后測定AdVEGFC：D廠rK滴度為221011pfu／ml。第二部分：A