迷迭香酸抗過(guò)氧化氫誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、研究背景:血管平滑肌細(xì)胞的凋亡參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展以及斑塊破裂損傷的整個(gè)過(guò)程,在斑塊形成、血管重構(gòu)、斑塊破裂以及血栓形成中起重要的作用。因此,控制血管平滑肌細(xì)胞凋亡目前已經(jīng)成為穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和防止嚴(yán)重后果的一個(gè)新思路。迷迭香酸是一種天然的水溶性酚類(lèi)化合物,具有抗氧化、抗炎癥、拮抗細(xì)胞內(nèi)高鈣等作用。我們?cè)^察到迷迭香酸在培養(yǎng)的ECV304細(xì)胞上能通過(guò)上調(diào)Bcl-2蛋白和下調(diào)Bax蛋白來(lái)拮抗H2O2誘導(dǎo)的凋亡,但是其對(duì)體外培

2、養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷及凋亡的影響尚不清楚,本實(shí)驗(yàn)旨在探討迷迭香酸對(duì)H2O2誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響,為開(kāi)發(fā)藥物新的藥理作用提供理論依據(jù)。
　　方法:首先用不同濃度的H2O2處理體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞24小時(shí),流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率,AO染色觀察形態(tài)學(xué)變化,確定H2O2最佳濃度,然后將培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞按如下分組處理:①正常對(duì)照組;②H2O2處理組;③迷迭香酸(10、20、40μmol/L)+H2O2組;④陽(yáng)

3、性藥Vit E+H2O2組;在不同濃度迷迭香酸或陽(yáng)性藥預(yù)處理30分鐘后,加入最佳濃度的H2O2繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí),采用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;Western-Blotting檢測(cè)細(xì)胞中Bcl-2、Bax、Fas和Fas L蛋白的表達(dá)。所有細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)之前均經(jīng)過(guò)無(wú)血清同步化處理24小時(shí)。
　　結(jié)果:流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè),0、250、500、750μmol/L的H2O2處理血管平滑肌細(xì)胞24小時(shí)后,細(xì)胞的凋亡率分別為3.

4、71±0.56％,17.6±6.92%,34.9±2.55%,85.6±5.22%,然后選擇500μmol/L的H2O2處理組做AO熒光染色,結(jié)果顯示細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、核碎裂等典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變,細(xì)胞凋亡率達(dá)34.9±2.55%,所以隨后實(shí)驗(yàn)選擇500μmol/L的H2O2為誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞凋亡的最佳濃度,而經(jīng)不同濃度的迷迭香酸預(yù)處理,可見(jiàn)①細(xì)胞的活性呈濃度依賴(lài)性升高(0.53±0.04、0.56±0.03、0.59±0.03 vs0

5、.50±0.03,P<0.05)。②細(xì)胞的凋亡率呈濃度依賴(lài)性降低(31.1±1.38%、21.2±1.18%、13.6±0.51% vs35.7±1.33%,P<0.05)。③細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)增加,Bax蛋白的表達(dá)降低,Bcl-2/Bax的蛋白比值升高, Fas和Fas L的蛋白表達(dá)減少,呈濃度依賴(lài)性。
　　結(jié)論:(1)迷迭香酸能拮抗H2O2誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞凋亡;(2)迷迭香酸拮抗血管平滑肌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制可能與升