ClC-3氯通道對過氧化氫誘導(dǎo)的大鼠主動脈平滑肌細胞凋亡的影響.pdf

1、氯離子通道是普遍存在于胞漿膜及胞內(nèi)細胞器膜上的跨膜蛋白，通過有選擇性地使氯離子進出細胞調(diào)節(jié)細胞的多種功能，如細胞膜電位的穩(wěn)定、胞內(nèi)pH的維持、跨上皮細胞物質(zhì)轉(zhuǎn)運、激素分泌、興奮性的調(diào)節(jié)等。ClC-3氯通道隸屬于ClC氯通道家族，其通道特性和功能目前尚未完全清楚。Duan等的研究結(jié)果提示ClC-3可能編碼了容積調(diào)節(jié)性氯通道，但隨后的一些研究對該假設(shè)持否定觀點，我們實驗室最近的研究結(jié)果表明，在A10血管平滑肌細胞上ClC-3氯通道參與了細胞

2、容積調(diào)節(jié)，是容積調(diào)節(jié)性氯通道的分子基礎(chǔ)。 細胞容積的穩(wěn)定是維持細胞正常生理功能的重要環(huán)節(jié)，而在不同的生理或病理情況下，細胞的容積常發(fā)生改變，表現(xiàn)為皺縮或腫脹，此時細胞通過啟動調(diào)節(jié)性容積增加(regulatoryvolumeincrease，RVI)或調(diào)節(jié)性容積減低(regulatoryvolumedecrease，RVD)機制可使細胞容積恢復(fù)正常。近年研究發(fā)現(xiàn)除了參與調(diào)節(jié)細胞容積外，容積調(diào)節(jié)性氯通道在免疫反應(yīng)，細胞膜電位穩(wěn)定，胞

3、內(nèi)酸堿平衡以及細胞的增殖、分化、凋亡等過程中亦發(fā)揮了重要作用。 細胞生長、增殖及凋亡過程都伴隨有細胞容積的改變。細胞分裂增殖的早期，大多數(shù)細胞都會因為代謝增強而增加氨基酸、有機、無機等營養(yǎng)物質(zhì)的攝取，同時伴隨水的進入，導(dǎo)致細胞腫脹，容積增大。細胞容積的改變，激活細胞膜K+通道和Cl-通道，通過RVD過程使細胞體積恢復(fù)到正常。而細胞凋亡過程中胞體皺縮是其典型的形態(tài)學(xué)變化特征，這種細胞皺縮在等滲條件下即可發(fā)生，主要與K+、Cl-外流

4、，及其伴隨的H2O的外流有關(guān)，被稱為凋亡性容積減低(apoptosisvolumedecrease，AVD)過程。研究表明，進行性的AVD過程最終可以誘發(fā)細胞凋亡，阻斷AVD過程則可以抑制凋亡的發(fā)生，提示AVD可能是細胞凋亡發(fā)生的上游事件。 細胞增殖和細胞凋亡是細胞生理過程的兩個方面，增殖和凋亡的平衡維持了細胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)態(tài)。我們實驗室以往的研究表明反義ClC-3寡核苷酸可抑制ET-1誘導(dǎo)的大鼠主動脈平滑肌細胞增殖，提示ClC-3

5、氯通道參與了血管平滑肌細胞增殖過程。但對于ClC-3氯通道與血管平滑肌細胞凋亡的關(guān)系尚未見報道。 基于我們實驗室原有的工作基礎(chǔ)，ClC-3氯通道有可能參與血管平滑肌的凋亡，為此本研究圍繞該問題，進行如下工作：建立H2O2誘導(dǎo)的大鼠主動脈平滑肌細胞凋亡模型；觀察轉(zhuǎn)染反義ClC-3寡核苷酸與gpClC-3-cDNA對H2O2誘導(dǎo)的大鼠主動脈平滑肌細胞凋亡的影響；H2O2誘導(dǎo)大鼠主動脈平滑肌細胞凋亡過程中靜息[Ca2+]i的變化及Cl