NF-kappaB抑制劑PDTC治療大鼠子宮內(nèi)膜異位癥的實驗研究.pdf

1、研究背景：長久以來，子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMS)的治療以手術(shù)和激素類藥物為主，但治療的效果并不理想。 目前，此病的致病機理還不清楚，研究的較充分而且依據(jù)較多的病因之一是各類細胞因子的致病作用。異位的子宮內(nèi)膜細胞在IL-1β、TNF-a的刺激下，通過NF-K B途徑產(chǎn)生MCP，而間質(zhì)細胞在刺激下可以產(chǎn)生大量的RANTES(調(diào)節(jié)活化正常T細胞表達與分泌的趨化因子)使單核細胞、T細胞、巨噬細胞活化并趨化進入炎癥

2、部位，同時這些細胞進一步產(chǎn)生IL-6、IL-8、FNF-α、IL-1β，從而構(gòu)成了正反饋回路，使炎癥反應(yīng)不斷加強<'[1]>。NF-kappaB抑制劑脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(PDTC)可抑制NF-kappaB活性，從而阻斷通過NF-kappaB途徑而產(chǎn)生的生物效應(yīng)<'[2]>。 研究目的： 本實驗將PDTC用于治療大鼠EMS，觀察其對大鼠EMS模型的治療效果。旨在尋找更為徹底的治療EMS的方法。 研究方法：

3、 選擇健康雌性SD大鼠60只，周齡8-10周，體重200-250g。參考Jones<'[3]>方法建立大鼠子宮內(nèi)膜異位癥動物模型，略有改動。 建模后3周，第二次剖腹檢察異位子宮內(nèi)膜的生長情況，移植灶體積增大，呈透明結(jié)節(jié)狀或囊狀，內(nèi)有淡黃色透明囊液積聚者為造模成功。游標卡尺測量異位結(jié)節(jié)長寬。已成模大鼠28只分成3組，一組作為陽性對照組，給予生理鹽水lml/100g/d腹腔注射，一組為PDTC組，100mg/kg/d腹腔注射，另一

4、組為亮丙瑞林組(LEU組)，0.1mg/100g皮下注射一次；造模不成功的大鼠32只，選擇8 只繼續(xù)喂養(yǎng)作為陰性對照組，處理同陽性對照組。 21天后結(jié)束給藥處理，給藥期間每隔一周稱量各組大鼠體重以觀察藥物相關(guān)毒副作用；結(jié)束給藥后第2天抽取心臟血，采用酶聯(lián)免疫分析(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測各組老鼠血清中IL-1β和TNF-a水平；同時第三次剖腹觀察異位子宮內(nèi)膜的生長情況

5、，再次游標卡尺測量異位結(jié)節(jié)長寬；切取異位子宮內(nèi)膜，置于中性甲醛中固定后，石蠟包埋，作4 u m厚連續(xù)切片，采用鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化酶(streptavedin-peFOXidase，SP)免疫組化法測各組異位內(nèi)膜NF-kappaB的表達情況。 所有數(shù)據(jù)都用均數(shù)±標準差(X±S)表示，用SPSS13.00統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，用t檢驗判斷用藥前后各組異位內(nèi)膜體積大??；方差分析檢驗治療后各組老鼠血清中IL-1β和TNF-a水平情況

6、；方差分析檢驗各組大鼠體重變化。P<0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。 研究結(jié)果： 1．治療前各組異位內(nèi)膜體積分別為：陽性對照組為20.52±5.25 mm<'2>，PDTC組為19.96±5.08 mm<'2>，LEU組為20.31±5.27 mm<'2>，各組之間差異均無顯著性(P>0.05)。 2．治療后各實驗組異位內(nèi)膜體積均縮小，各實驗組治療前后異位內(nèi)膜體積差之間比較：陽性對照組與PDTC組分別為6.81±3.42

7、 mm<'2>及13.18±3.63 mm<'2>，兩者差異有顯著性(P<0.05)；陽性對照組與LEU組分別為6.81±3.42 mm<'2>及14.90±5.17 mm<'2>，兩者差異有顯著性(P<0.05)；PDTC組與LEU組分別為13.18±3.63 mm<'2>及14.90±5.17 mm<'2>，兩者之間無顯著性差異(P>0.05)。 3.治療后各組大鼠血清TNF-α水平比較： ①陰性對照組與陽性對照組分

8、別為17.06±7.60pg/ml及30.04±9.43pg/ml，兩者之間差異有顯著性(P<0.05)； ②陽性對照組與PDTC組分別為30.04±9.43 pg/ml及13.67±8.91pg/ml，兩者之間差異有顯著性(P<0.05)； ③陽性對照組與LEu組分別為30.04±9.43 pg/ml及26.82±9.98pg/ml，兩者之間差異無顯著性(P>0.05)： ④PDTC組與LEu組分別為13.67

9、±8.91 pg/ml及26.82±9.98pg/ml，兩者之間差異有顯著性(P<0.05)。 4.治療后各組血清IL-1β水平比較： ①陰性對照組與陽性對照組分別為22.87±9.03pg/ml及33.23±5.78pg/ml，兩者之間差異有顯著性(P<0.05)； ②陽性對照組與PDTC組分別為33.23±5.78 pg/ml及15.88±6.26pg/ml，兩者之間差異有顯著性(P<0.05)： ③

10、陽性對照組與LEu組分別為33.23±5.78 pg/ml及26.52±8.93pg/ml，兩者之間差異無顯著性(P>0.05)； ④PDTC組與LEU組分別為15.88±6.26pg/ml及26.52±8.93 pg/ml，兩者之間差異有顯著性(P<0.05)。 5.異位子宮內(nèi)膜NF-kappaB免疫組化檢測結(jié)果及子宮內(nèi)膜鏡下形態(tài)觀察情況： 檢測中陽性者為腺上皮細胞細胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒染色，陽性對照組及各治療

11、組異位內(nèi)膜腺上皮細胞中細胞漿均顯示不同程度的染色，也可見細胞核染色，但染色細胞核占總的細胞核的比率小(陽性細胞率<5％)，以至統(tǒng)計學(xué)分析困難，無明顯意義。從形態(tài)學(xué)上可見：對照組子宮內(nèi)膜腺上皮細胞及間質(zhì)細胞生長旺盛，而PDTC組及LEU組子宮內(nèi)膜腺上皮細胞及間質(zhì)細胞萎縮。 6．觀察各組大鼠體重改變情況以了解PDTC毒副作用： 陰性對照組，陽性對照組，LEU組三組的體重均是隨著時間增加而增加的(P<0．05)，PDTC組的體

12、重W4>W3、W2、W1，W2>W1(P<0．05)，提示給藥前至給藥第1周體重有所增加，之后1周體重無明顯改變，在給藥第三周體重增加達到最大值：第1、2、3、4同一時間點，各組的體重差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0．05)。 (注：w1為給藥前所測體重，w2為給藥一周后所測體重，W3為給藥兩周后所測體重，w4為給藥三周后所測體重) 研究結(jié)論： 1．治療前各組異位內(nèi)膜體積差異均無顯著性；治療后陽性對照組與各治療組異位病灶體積

13、均有縮小，但各治療組與陽性對照組之間差異均有顯著性，而治療組PDTC組及LEU組兩者之間差異無顯著性，說明PDTC與LEU均可使大鼠EMS模型異位病灶顯著縮小，但兩者效果之間無統(tǒng)計學(xué)差異； 2．ELISA結(jié)果示PDTC組大鼠血清中TNF-a水平及IL-1β水平均較陽性對照組及LEU組低，說明PDTC比亮丙瑞林能更明顯地降低EMS大鼠血清中TNF-a及IL-1β，考慮與PDTC治療大鼠EMS的機制有關(guān)； 3．各實驗組異位子