金黃色葡萄球菌毒力調(diào)控蛋白SarV、SarX和RNA酶J1、J2的結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究.pdf

1、細(xì)菌感染是導(dǎo)致人類各種疾病的重要原因。但隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，細(xì)菌的抗藥性也越來(lái)越嚴(yán)重。金黃色葡萄球菌是一種在醫(yī)院和社區(qū)中廣泛存在的條件致病菌，其感染能導(dǎo)致食物中毒、肺炎、腦膜炎、心內(nèi)膜炎和中毒性休克綜合癥等嚴(yán)重疾病。由于它對(duì)包括萬(wàn)古霉素在內(nèi)的幾乎所有抗生素的耐藥性，金黃色葡萄球菌感染的發(fā)病率和死亡率一直高居不下，已經(jīng)成為危害人類健康的一個(gè)非常嚴(yán)重的問(wèn)題。
　　金黃色葡萄球菌感染一般從傷口擴(kuò)散到血液，進(jìn)一步侵染到宿主的不同組織。進(jìn)

2、入組織后，金黃色葡萄球菌會(huì)產(chǎn)生大量毒力因子，包括細(xì)菌表面相關(guān)蛋白、酶、外毒素、莢膜多糖及能進(jìn)行組織定位、組織破壞和免疫逃避的基因產(chǎn)物。這類毒力基因的表達(dá)受調(diào)控基因的調(diào)控，比如雙組份調(diào)控系統(tǒng)(agr、saeRS、srrAB、arlRS)和全局轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)（sarA、sigB、sarA同系物、tcaRA等）。SarⅤ和SarⅩ就是全局轉(zhuǎn)錄調(diào)控系統(tǒng)中的一員，對(duì)于細(xì)菌的侵染和毒力調(diào)控非常重要。我們希望通過(guò)解析SarⅤ和SarⅩ的晶體結(jié)構(gòu)及其與D

3、NA復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，了解其與DNA結(jié)合機(jī)制從而進(jìn)一步了解它們對(duì)毒力因子表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，為抗菌藥物的研發(fā)提供線索。
　　RNA的降解過(guò)程需要受到嚴(yán)格的調(diào)控，從而保證降解過(guò)程是有序和協(xié)調(diào)的。雖然RNA降解體在組成上不保守，在進(jìn)化上也沒(méi)有共同的祖先，但在不同的細(xì)菌中都能發(fā)現(xiàn)降解體的存在，這暗示了RNA降解體在細(xì)菌的RNA代謝過(guò)程中扮演著重要角色。金黃色葡萄球菌中RNA降解體包含enolase、pfkA、PNPase、RNase J1、RN

4、ase J2、RNase Y、CshA等多種組分，其中RNA降解主要由RNaseJ1和RNase J2來(lái)完成。雖然人們對(duì)RNA的降解已經(jīng)進(jìn)行了較多的研究，但是RNA降解體的裝配過(guò)程以及各成員之間的相互作用機(jī)制卻并不清楚。我們希望通過(guò)對(duì)RNase J1和J2的結(jié)構(gòu)和功能的研究，揭示其在金黃色葡萄球菌RNA降解體中的作用機(jī)理。
　　我們對(duì)SarⅩ和SarⅤ進(jìn)行了表達(dá)純化與晶體篩選，收集了野生型SarⅤ蛋白晶體的X-射線衍射數(shù)據(jù);也得到