脂肪來(lái)源干細(xì)胞復(fù)合聚己內(nèi)酯-殼聚糖修復(fù)膀胱缺損的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：對(duì)比聚己內(nèi)酯/殼聚糖（Polycaprolactone/chitosan，PCL/CS）和聚己內(nèi)酯/聚乳酸（Polycaprolactone/ polylactic acid，PCL/PLA）的生物相容性；研究脂肪來(lái)源干細(xì)胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）復(fù)合PCL/CS，修復(fù)大面積膀胱缺損并探討其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：①分離人ADSCs，制備PCL/CS，PCL/PLA復(fù)合支架，ADSC

2、s經(jīng)體外培養(yǎng)、擴(kuò)增鑒定后，接種支架材料，裸鼠皮下培養(yǎng)2周，組織學(xué)鑒定其生物相容性，并取細(xì)胞相容性較好的支架行細(xì)胞毒性鑒定。②優(yōu)選細(xì)胞相容性較好的支架PCL/CS后，分離SD大鼠ADSCs，體外培養(yǎng)、擴(kuò)增后，以CM-Dil熒光染料標(biāo)記，接種PCL/CS，體外培養(yǎng)2天，對(duì)SD大鼠行大面積膀胱缺損修復(fù)，依此為實(shí)驗(yàn)組；對(duì)照組為單純PCL/CS。術(shù)后4周組織學(xué)檢測(cè)膀胱缺損修復(fù)情況，免疫熒光檢測(cè)植入 ADSCs的轉(zhuǎn)歸情況。
　　結(jié)果：①通過(guò)冷

3、凍干燥技術(shù)以及真空熱交聯(lián)的方法制備的PCL/CS和PCL/PLA均具有疏松多孔結(jié)構(gòu)，ADSCs復(fù)合支架裸鼠體內(nèi)培養(yǎng)2周后，大量細(xì)胞滲透到支架材料內(nèi)部，相對(duì)于PCL/PLA，PCL/CS支架可見到更多的ADSCs滲入其結(jié)構(gòu)內(nèi)部，同時(shí)經(jīng)過(guò)HLA-Ⅰ抗體檢測(cè)后我們可發(fā)現(xiàn)，支架材料內(nèi)部分細(xì)胞呈現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，從而進(jìn)一步說(shuō)明PCL/CS支架內(nèi)該部分的細(xì)胞來(lái)源于人體，即人的脂肪來(lái)源干細(xì)胞ADSCs。ADSCs在PCL/CS浸提液中保持較高的增值率，PC

4、L/CS浸提液細(xì)胞毒性為0級(jí)，即無(wú)細(xì)胞毒性。②術(shù)后4周組織學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均有多層尿路上皮再生，而實(shí)驗(yàn)組的平滑肌再生情況明顯優(yōu)于對(duì)照組，且實(shí)驗(yàn)組大鼠具有更大的膀胱容積，免疫熒光檢測(cè)發(fā)現(xiàn)部分膀胱平滑肌細(xì)胞表達(dá)CM-Dil的紅色熒光，表明該部分平滑肌細(xì)胞由植入的ADSCs轉(zhuǎn)化而來(lái)。
　　結(jié)論：通過(guò)生物相容性實(shí)驗(yàn)，我們得出：相對(duì)于PCL/PLA，PCL/CS具有更好的細(xì)胞相容性，且PCL/CS安全可靠且無(wú)毒，該支架可以作為種子細(xì)