豬鏈球菌3種主要毒力因子多重PCR快速檢測方法的建立及其初步應(yīng)用.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcus suis，SS)是一種重要的人畜共患病病原，根據(jù)菌體莢膜多糖抗原性的不同，分為35個血清型(1-34型，1/2型)。世界范圍內(nèi)以SS2(Streptococcus suis type2，SS2)流行最廣，致病性最強，而且可引起人的感染并致死，其次是1型、7型和9型。上海地區(qū)作為全國大規(guī)模豬養(yǎng)殖場較多的地區(qū)之一，是養(yǎng)豬面積較大，輸出、輸入較大的城市，因此及時掌握上海地區(qū)致病性豬鏈球菌及其毒力因子的流行

2、病學(xué)，為以后預(yù)防和控制大規(guī)模暴發(fā)豬鏈球菌具有重要的意義。 2006年-2008年期間，通過對上海市動物疫病預(yù)防控制中心日常門診和4個某大型豬場的豬鏈球菌2型臨床調(diào)查，根據(jù)形態(tài)、培養(yǎng)特性，從1536份樣品中分離鑒定了304株豬源鏈球菌，利用已發(fā)表的豬鏈球菌2型菌株的莢膜多糖CPS2J的基因進(jìn)行單重PCR檢測，結(jié)合生化特性鑒定，鑒定出12株豬鏈球菌2型。對12株SS2進(jìn)行藥敏試驗，結(jié)果表明對頭孢拉啶、青霉素等產(chǎn)生了一定程度的耐藥性，

3、生化試驗結(jié)果表明分離株的生化特性不穩(wěn)定。 建立了豬鏈球菌3種主要毒力因子多重PCR快速檢測方法，實現(xiàn)對豬鏈球菌3種主要毒力因子的快速檢測，根據(jù)豬鏈球菌3種主要毒力因子epf、sly和gapdh的基因序列，設(shè)計合成3對特異性引物，通過優(yōu)化多重PCR體系，建立豬鏈球菌3種主要毒力因子的快速檢測方法，并用此多重PCR方法對16株毒力因子背景情況清楚的豬鏈球菌菌株(包括10株SS2，3株SS1、1株SS7、2株SS9)進(jìn)行檢測，結(jié)果與已

4、知背景情況相符合，表明此方法檢測的結(jié)果具有較高的準(zhǔn)確性。結(jié)果表明建立的多重PCR方法具有特異性高、敏感性好、重復(fù)性高，操作簡單、節(jié)約時間和低成本等特點。為該病快速診斷和對豬鏈球菌毒力因子的分子流行病調(diào)查提供新的檢測方法。 利用建立的豬鏈球菌3種主要毒力因子多重PCR方法檢測了273株致病性豬鏈球菌菌株，以分析其三種重要毒力因子的分布。結(jié)果表明gapdh、epf和sly在致病性豬鏈球菌中檢出率比較高，檢出率分別為36.2％(99/