豬鏈球菌2型毒力島的檢測(cè)及trag基因缺失株的構(gòu)建.pdf

1、豬鏈球菌（Streptococcussuis）是一種革蘭氏陽(yáng)性、兼性厭氧的球菌?？梢鹭i腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥，同時(shí)可引起人中毒性休克綜合征，感染后遺癥包括失聰和關(guān)節(jié)炎，是一種重要的人畜共患病病原。根據(jù)其莢膜多糖抗原性的差異，分為35個(gè)血清型（1-34，1/2）及相當(dāng)數(shù)量無(wú)法定型的菌株。菌株之間在毒力上存在著很大的差異，致病性強(qiáng)弱與其毒力島的存在與否有很大關(guān)系。本研究以毒力最強(qiáng)、危害最嚴(yán)重、流行最廣泛的豬鏈球菌2型（Strep

2、tococcussuistype2，SS2）為研究對(duì)象，構(gòu)建了感染相關(guān)因子trag基因的缺失株，通過(guò)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)了該突變株的毒力。同時(shí)，對(duì)于新發(fā)現(xiàn)的89K毒力島，PCR檢測(cè)了其在不同來(lái)源、不同血清型、不同地區(qū)的豬鏈球菌上的分布。
　　 1、豬源毒力島89K的檢測(cè)
　　 根據(jù)新發(fā)現(xiàn)的89K毒力島的序列設(shè)計(jì)引物，PCR檢測(cè)此毒力島在不同來(lái)源、不同血清型、不同地區(qū)的豬鏈球菌上的分布。結(jié)果表明，在40株不同來(lái)源、不同血清型的菌株

3、中，只有12株含有89K毒力島，且均為豬鏈球菌2型，其中兩株為人源株，其他為豬源株。在豬鏈球菌9型和馬獸疫亞種中均為陰性。
　　 2、豬鏈球菌2型HA9801trag基因缺失株的構(gòu)建
　　 根據(jù)豬鏈球菌2型人源98HAH33菌株全基因序列設(shè)計(jì)引物，構(gòu)建中間為壯觀(guān)霉素抗性基因，兩側(cè)為trag編碼基因上、下游同源序列的基因敲除載體，通過(guò)同源重組構(gòu)建trag基因缺失的突變株。PCR鑒定顯示獲得1株trag基因被敲除的突變株HA

4、9801△trag。體外觀(guān)察突變株HA9801△trag的基本生物學(xué)性狀，發(fā)現(xiàn)其革蘭氏染色及溶血性與野毒株相比沒(méi)有明顯變化，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示：野毒株對(duì)斑馬魚(yú)的LD50為3.8×104CFU/尾，trag缺失株為4.9×105CFU/尾，毒力相比有所下降。為進(jìn)一步探討豬鏈球菌2型分子致病機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。
　　 3、豬鏈球菌2型溶血素Ⅲ相關(guān)膜蛋白的表達(dá)
　　 溶血素Ⅲ相關(guān)膜蛋白位于89K毒力島中。根據(jù)已發(fā)表的豬鏈球菌2型人源98