豬鏈球菌2型部分毒力基因序列測定及血清學(xué)調(diào)查分析.pdf

1、豬鏈球菌2型不僅可引起豬腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、肺炎和突然死亡，還可以感染相關(guān)人員并致死，是一種重要的人畜共患病病原。近些年來，豬鏈球菌2型在我國時有暴發(fā)流行，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)和社會公共衛(wèi)生安全。有關(guān)豬鏈球菌2型的病原生態(tài)學(xué)、流行病學(xué)的一些問題尚未完全明了，各地豬群豬鏈球菌2型的易感水平和豬鏈球菌2型人際感染風(fēng)險等研究缺乏必要、充足的依據(jù)。為此，我們開展了豬鏈球菌2型病原學(xué)、分子生物學(xué)和血清學(xué)診斷技術(shù)研究，對福建省各地區(qū)豬場血清

2、樣品的豬鏈球菌2型抗體水平進行了調(diào)查分析，以期為豬2型鏈球菌病的監(jiān)控提供科學(xué)數(shù)據(jù)。 本實驗對疑似豬鏈球菌2型的福建分離株進行了菌落、菌體形態(tài)學(xué)，菌株生化特性、藥敏試驗和毒力等相關(guān)特性的觀察、分析，并將其命名為PFJ07。試驗結(jié)果顯示，PFJ07的形態(tài)、培養(yǎng)及生化特性基本符合豬鏈球菌2型的特點，具有β溶血，能在48h內(nèi)致死小白鼠。 根據(jù)豬鏈球菌2型CPS2J基因序列設(shè)計、合成了一對特異性引物，以PFJ07基因組DNA模板，

3、擴增出長度為675bp的特異性條帶，所有供試陽性參考菌株擴增出相同的DNA片段，所有非2型豬鏈球菌和其它陰性參考菌株不產(chǎn)生任何條帶。優(yōu)化了PCR反應(yīng)條件，分別測定了PCR反應(yīng)的菌體模板和菌體基因組DNA模板的檢測靈敏度，結(jié)果表明該檢測方法對菌體模板的靈敏度為100cfu，對DNA模板的靈敏度為50pg，方法特異、靈敏，可以直接將菌體用作模板方法十分簡便。分析了PFJ07的CPS2J基因675bpDNA片段的序列，證實PFJ07菌株的CP

4、S2J基因核苷酸序列與豬鏈球菌2型標(biāo)準(zhǔn)菌株CPS2J基因核苷酸序列的同源性高達(dá)98-100％，因此確定PFJ07是豬鏈球菌2型菌株，并命名為SS2PFJ07。這也是首次在福建省發(fā)現(xiàn)豬鏈球菌2型菌株。對SS2PFJ07相關(guān)毒力基因MRP與EF進行了檢測，并對其序列進行了分析與比較。確定SS2PFJ07的表型為MRP+EF-，確定PFJ07菌株的MRP基因核苷酸序列與豬鏈球菌2型標(biāo)準(zhǔn)菌株MRP基因核苷酸序列的同源性達(dá)88％，這些為豬鏈球菌2

5、型的毒力測定及免疫學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。 采用商品化的豬鏈球菌2型血清抗體檢測試劑盒，對來自福建省9個地區(qū)，77個豬場，1347份血清樣品進行了調(diào)查分析。結(jié)果表明各個豬場群體血清抗體陽性率差異很大，陽性率范圍從0％至94％；各地區(qū)陽性豬場數(shù)范圍從22-100％不等；檢出陽性豬場時占檢測豬場總數(shù)的53％。結(jié)果提示，福建養(yǎng)豬場存在豬鏈球菌2型菌株的疫源地，部分豬場存在豬鏈球菌2型感染的可能，全省各地存在發(fā)生豬鏈球菌2型感染的風(fēng)險。