豬鏈球菌主要毒力基因的多重PCR檢測及其核糖體基因多態(tài)性研究.pdf

1、豬鏈球菌(Streptococcussuis，SS)是危害現代養(yǎng)豬業(yè)的一種重要人獸共患病病原，該菌血清型多、抗原結構復雜，在臨床上可呈現不同的特征，如敗血癥、腦膜炎、心內膜炎、肺炎、關節(jié)炎等，還常常與其他疾病合并感染，發(fā)病率和死亡率較高。由于目前對豬鏈球菌病的發(fā)生規(guī)律、病原特性以及防治措施還不是十分清楚，單純靠藥物又不能有效地控制該病的發(fā)生和蔓延。本研究在對山東地區(qū)分離的豬鏈球菌菌株進行培養(yǎng)、鑒定基礎上，建立PCR方法進行血清分型和毒力

2、基因檢測，并應用核糖體基因探針雜交方法對部分地區(qū)的分離株進行基因分型，以便為該病的免疫防治提供理論依據。本課題分為三個部分進行研究。 1.山東省致病性豬鏈球菌血清型及耐藥性狀況調查通過革蘭氏染色鏡檢、生化試驗、藥敏試驗及PCR分型鑒定，對臨床分離的豬源鏈球菌進行血清型和分子流行病學的初步研究。從山東省不同地區(qū)的發(fā)病豬分離到的20株豬源鏈球菌，其形態(tài)、染色、培養(yǎng)特征及理化特性均符合豬鏈球菌的特點，采用豬鏈球菌特異性鑒別引物分別進行

3、PCR擴增，確認9株為豬鏈球菌，經PCR分型，其中4株鑒定為1型菌株，沒有2、7、9型的菌株，其余未定型。藥敏試驗結果顯示，山東地區(qū)豬鏈球菌僅對氨芐西林、阿米卡星、頭孢噻肟、頭孢唑啉敏感，而對其他常規(guī)藥物已產生了不同程度的耐藥性。 2.豬鏈球菌三種主要毒力基因的多重PCR檢測根據豬鏈球菌三種主要毒力因子Sly，MRP，EF的基因序列設計和合成了3對特異性引物，通過體系和反應條件優(yōu)化，建立多重PCR檢測方法，對實驗室保存的16株背

4、景明確的豬鏈球菌進行檢測，結果顯示S1y檢出率為4/16，MRP檢出率為2/16，EF檢出率為0，陽性、陰性對照均成立。分析結果表明該多重PCR檢測方法，特異性和敏感性較好，可用于快速診斷以及豬鏈球菌相關毒力因子的分子流行病學調查。 3.豬鏈球菌核糖體基因多態(tài)性的研究為探討豬鏈球菌株的分子流行病學特征以及菌株間的相互關系，對山東和河南地區(qū)2003-2006年間分離的20株豬鏈球菌進行核糖體基因多態(tài)性的研究。豬鏈球菌基因組DNA用