抗血管緊張素轉(zhuǎn)化酶降解的AcSDKP異構(gòu)體的篩選和活性研究.pdf

1、目的：
　　AcSDKP是一個氮端乙酰化的內(nèi)源性四肽，主要由它的前體物胸腺素β4經(jīng)由脯氨酰寡肽酶（POP）水解而釋放。在血液中的濃度一般為納摩爾級。AcSDKP是一種多功能性生理調(diào)控因子，具有多種生物學(xué)活性，如抑制心臟成纖維細(xì)胞增殖，造血干細(xì)胞生長等。然而，AcSDKP在體內(nèi)能夠被血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）降解,失去其結(jié)構(gòu)和功能，從而為其臨床應(yīng)用帶來困難。本課題擬通過對AcSDKP進(jìn)行D型氨基酸的改構(gòu)，獲得一種能夠不被ACE降解，

2、同時又保持其原有的抗纖維化生物學(xué)活性的AcSDKP異構(gòu)體小肽，以期為AcSKDP在抗纖維化方面的應(yīng)用提供理論和實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　以D型氨基酸替代的方式構(gòu)建AcSDKP異構(gòu)體，采用Fmoc-固相合成AcSDKP異構(gòu)體，并通過高效液相色譜（HPLC）進(jìn)行純化。然后通過HPLC檢測異構(gòu)體AcSDKP抗ACE降解的能力；MTT法和BrdU法檢測異構(gòu)體AcSDKP對小鼠成纖維細(xì)胞（L929）和原代培養(yǎng)的心臟成纖維細(xì)胞增殖的影

3、響；流式細(xì)胞術(shù)檢測異構(gòu)體AcSDKP對骨髓干細(xì)胞（BMSC）向巨噬細(xì)胞分化的影響。Westernblot方法檢測異構(gòu)體AcSDKP對心臟成纖維細(xì)胞磷酸化Smad2蛋白（P-Smad2）表達(dá)的影響。構(gòu)建SD大鼠肝纖維化模型，通過對肝臟組織切片HE染色觀察和血清中相關(guān)指標(biāo)的生化檢測，研究AcSDKP異構(gòu)體對肝纖維化的影響。
　　結(jié)果：
　　成功合成了AcSDKP以及三種異構(gòu)體AcSDKP（AcSD(d)KP,AcSDK(d)P，

4、AcSD(d)K(d)P），純度均在98％以上。ACE降解實驗證實，而三種異構(gòu)體AcSDKP均能夠抵抗ACE降解。AcSD(d)K(d)P對L929細(xì)胞和心臟成纖維細(xì)胞增殖均有抑制作用。AcSD(d)K(d)P能夠抑制BMSC向巨噬細(xì)胞分化。AcSD(d)K(d)P能抑制心臟成纖維細(xì)胞P-Smad2的表達(dá)。動物證實AcSD(d)K(d)P具備一定的抗肝纖維化活性，對肝臟有一定的保護(hù)作用。
　　結(jié)論：
　　成功構(gòu)建了能夠抵抗A