氟伐他汀對高糖誘導足細胞向間葉細胞轉(zhuǎn)分化的影響.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：高糖對足細胞向間葉細胞轉(zhuǎn)分化的影響
　　 目的：通過觀察高糖是否引起小鼠足細胞發(fā)生上皮-間葉細胞轉(zhuǎn)分化現(xiàn)象，探討糖尿病腎小球損傷的可能機制。
　　 方法：以小鼠永生化足細胞株為研究對象，予不同濃度葡萄糖(12.5mM，25mM，50mM)處理該細胞36小時，并設(shè)低糖(5.6mM)和甘露醇(50mM)處理組為對照組。采用蛋白免疫印跡和間接免疫熒光染色方法檢測a-平滑肌細胞肌動蛋白

2、(α-SMA)，F(xiàn)N(fibronectin)，CD2-相關(guān)蛋白(CD2AP)和Wilms'腫瘤1基因(WT-1)蛋白的表達。
　　 結(jié)果：低糖(5.6mM)和甘露醇(50mM)處理條件下小鼠足細胞表達高水平WT-1、CD2AP，基本不表達α-SMA和FN;而予不同濃度葡萄糖處理36小時后，足細胞中a-SMA和FN表達水平呈劑量依賴性升高(P

3、例明顯增加(P　　 結(jié)論：在高糖條件下，足細胞發(fā)生向間葉細胞表型的轉(zhuǎn)分化可能是引起足細胞功能失調(diào)，進而引起糖尿病腎小球損傷發(fā)生的作用機制之一。
　　 第二部分：氟伐他汀對高糖誘導足細胞向間葉細胞轉(zhuǎn)分化的影響
　　 目的：通過體內(nèi)體外研究探討他汀類藥物保護高糖誘導的糖尿病腎小球損傷的可能機制。
　

4、　 方法：體外部分：給予25mM D-葡萄糖刺激的同時給予不同濃度氟伐他汀處理該細胞36小時。采用蛋白免疫印跡檢測α-平滑肌細胞肌動蛋白(α-SMA)，F(xiàn)ibemectin(FN)，CD2-相關(guān)蛋白(CD2AP)和Wilms'腫瘤1基因(WT-1)蛋白的表達。間接免疫熒光檢測a-SMA。體內(nèi)部分：C57BL/6小鼠隨機分為正常組(n=4)，糖尿病未治療組(n=5)，糖尿病氟伐他汀低劑量(5mg·kg-1·d-1)灌胃組(n=5)，糖尿

5、病氟伐他汀高劑量(20mg·kg-1·d-1)灌胃組(n-5)。于4周，8周，12周收集小鼠的尿液檢測尿蛋白值。在此基礎(chǔ)上，另一批小鼠(分組為：正常對照組(n=4)，糖尿病組(n=5)和氟伐他汀低劑量組(n=5))，選取8周作為時間點猝死，透射電鏡觀察足細胞形態(tài)變化。間接免疫熒光檢測α-平滑肌細胞肌動蛋白(α-SMA)，F(xiàn)ibernectin(FN)，CD2-相關(guān)蛋白(CD2AP)和Wilms'腫瘤1基因(WT-1)蛋白的表達。

6、　　 結(jié)果：
　　 體外部分：低糖(5.6mM)條件下小鼠足細胞表達高水平WT-1、CD2AP，基本不表達α-SMA和FN;予25mM葡萄糖處理36小時后，足細胞中α-SMA和FN表達水平升高。同時可抑制WT-1和CD2AP的表達。在此實驗基礎(chǔ)上給予不同濃度的氟伐他汀處理，結(jié)果表明氟伐他汀可以部分逆轉(zhuǎn)高糖的上述作用。
　　 體內(nèi)部分：糖尿病小鼠蛋白尿較正常對照組增高(p<0.05)，8周時氟伐他汀組小鼠蛋白尿均較糖尿病

7、組小鼠下降(p<0.05)；8周時正常對照組小鼠足細胞足突排列整齊，足細胞表達高水平WT-1、CD2AP，基本不表達α-SMA和FN;糖尿病小鼠腎小球足細胞足突消失融合，WT-1，CD2AP表達下降，α-SMA和FN表達上升；氟伐他汀大劑量組足突較高糖組改善，WT-1和CD2AP表達較高糖組上升，α-SMA和FN較高糖組下降。
　　 結(jié)論：體外和體內(nèi)研究表明：氟伐他汀可以在一定程度上抑制高糖誘導的足細胞發(fā)生向間葉細胞表型的轉(zhuǎn)分化