兒茶素酶促低聚反應(yīng)的初步研究和紅茶酯提取物的分離及活性分析.pdf

1、兒茶素低聚合物具有良好的生物活性如抗動脈粥樣硬化、防止皮膚癌等，有些活性甚至高于兒茶素單體，其形成條件和途徑比較復(fù)雜。本試驗以兒茶素的消耗量和茶黃素的生成量為評價指標(biāo)，結(jié)合反應(yīng)前后體系對紫外可見光的吸收變化及HPLC/MS的分子量信息，確定以下酶促低聚反應(yīng)體系：溫度20℃，反應(yīng)底物50mg，緩沖液(pH=5.0的磷酸緩沖液與丙酮按體積比為1:10)11ml，辣根過氧化物酶0.8mg，H2O2(3％v/v)0.3ml，磁力攪拌轉(zhuǎn)速為700

2、rpm，反應(yīng)1h，pH=1.87的檸檬酸2ml終止反應(yīng)。篩選8組反應(yīng)底物采用此酶促低聚體系進(jìn)行反應(yīng)，除生成結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的茶黃素類衍生物，底物還聚合或分解產(chǎn)生分子量在200～1200之間、聚合度在五以內(nèi)的低聚合物，其理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步鑒定。 對紅茶乙酸乙酯提取物進(jìn)行分離純化及活性研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，結(jié)合柱層析、分析型HPLC及制備型HPLC可對大吉嶺紅茶酯層提取物進(jìn)行有效地分離分析，得到7個峰組分，并從峰3中分離出兩種黃酮甙的混

3、合物，HPLC/MS及NMR確認(rèn)為槲皮素-3-βD-葡萄糖甙及槲皮素-3-β-D-半乳糖甙；采用表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、茶多酚(TP)、茶黃素(TF)、茶黃素單沒食子酸酯(TFMG)、茶黃素雙沒食子酸酯(TFDG)作為對照，對紅茶酯提取物的分離組分進(jìn)行總抗氧化、清除OH·、O2-·、和DPPH·活性試驗，并采用SAS軟件進(jìn)行差異顯著性比較。結(jié)果表明，紅茶提取物中兒茶素單體和低聚物的活性要高于高聚物，從而為篩選高活性紅茶組分