蜂斗菜素抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖作用的分子機制研究.pdf

1、近年來，從天然產(chǎn)物中尋找有效的抗腫瘤活性成分不僅是腫瘤治療的研究熱點，而且也是當(dāng)前藥物界研究的熱點。蜂斗菜素是菊科蜂斗菜屬植物的有效活性成分之一。我們課題組在之前的研究中發(fā)現(xiàn)，蜂斗菜素對神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞系的增殖有很高的抑制活性，對SH-SY5Y細(xì)胞系也有一定的增殖抑制活性。初步研究提示，蜂斗菜素對兩種細(xì)胞增殖抑制作用的分子機制并不相同。本研究著重于探討蜂斗菜素在兩種神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中發(fā)揮作用的分子靶點，為闡明蜂斗菜素抗腫瘤

2、作用的分子機制提供一定的實驗依據(jù)。
　　本研究利用基因芯片技術(shù)檢測蜂斗菜素作用后SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞中整體基因的表達(dá)變化情況;利用實時熒光定量PCR(RT-qPCR)技術(shù)進(jìn)行基因芯片結(jié)果的驗證;之后對篩選出的腫瘤相關(guān)基因egr1、ctgf和gadd45a等進(jìn)行定量檢測，從基因水平進(jìn)一步推斷蜂斗菜素作用的分子靶點及可能機制。
　　結(jié)果顯示，0.8μmol·L-1的蜂斗菜素作用于SK-N-SH細(xì)胞8h后，實驗組與對

3、照組細(xì)胞相比得到顯著差異表達(dá)基因15條，其中10條基因表達(dá)明顯上調(diào)，5條基因表達(dá)明顯下調(diào);50μmol·L-1的蜂斗菜素作用于SH-SY5Y細(xì)胞8h后，實驗組與對照組細(xì)胞相比得到顯著差異表達(dá)基因90條，其中表達(dá)明顯上調(diào)的基因有48條，表達(dá)明顯下調(diào)的基因有42條。采用RT-qPCR技術(shù)對基因芯片結(jié)果進(jìn)行驗證，證實了基因芯片結(jié)果的可靠性。從基因芯片結(jié)果中篩選出腫瘤相關(guān)的差異表達(dá)基因egr1、ctgf和gadd45a，進(jìn)一步檢測在蜂斗菜素作用

4、不同時間后，SK-N-SH細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞中此3個基因的表達(dá)變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蜂斗菜素均能瞬時上調(diào)egr1基因的表達(dá)，隨著作用時間的延長，在SK-N-SH細(xì)胞中，蜂斗菜素的作用逆轉(zhuǎn)為抑制egr1基因的表達(dá)，而在SH-SY5Y細(xì)胞中，其表達(dá)水平則恢復(fù)至正常;對于ctgf基因來說，蜂斗菜素作用8h后可引起其在SK-N-SH細(xì)胞中表達(dá)水平下調(diào)，而在SH-SY5Y細(xì)胞中由于該基因表達(dá)量相對較低而未檢測到;蜂斗菜素作用過程中，gadd4

5、5a基因在SK-N-SH細(xì)胞中的表達(dá)均較穩(wěn)定，不受藥物影響，相反，在SH-SY5Y細(xì)胞中，其表達(dá)量則在蜂斗菜素作用4h后持續(xù)升高。
　　綜上所述，蜂斗菜素作用后，SK-N-SH細(xì)胞及SH-SY5Y細(xì)胞中均涉及多種類型基因的表達(dá)變化，這些表達(dá)變化顯著的基因包括抑癌基因、細(xì)胞周期蛋白基因、生長因子及其受體基因、信號傳導(dǎo)相關(guān)基因、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子基因、細(xì)胞代謝調(diào)節(jié)相關(guān)基因和細(xì)胞死亡相關(guān)基因等。蜂斗菜素對SK-N-SH細(xì)胞的增殖抑制及周期阻滯