MYCN在神經(jīng)母細胞瘤中表達及其作用的研究.pdf

1、神經(jīng)母細胞瘤(neuroblastoma，NB)是兒童最常見的惡性實體腫瘤之一，占兒童腫瘤死亡人數(shù)的15％，其惡性程度高，可早期轉(zhuǎn)移至骨髓、骨組織，預(yù)后較差，故深入研究NB的發(fā)生、發(fā)展機理至關(guān)重要。
　　MYCN是MYC家族成員，可編碼核蛋白轉(zhuǎn)錄因子，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展轉(zhuǎn)移中有重要作用。約25％～30％的神經(jīng)母細胞瘤患兒 MYCN基因呈高表達，與低生存率，腫瘤復(fù)發(fā)，預(yù)后差及對化療藥物敏感性降低等相關(guān)。因而深入了解MYCN在神經(jīng)母細胞

2、瘤發(fā)生發(fā)展中的作用及機制對神經(jīng)母細胞瘤治療產(chǎn)生積極的影響。
　　本課題共分兩個部分：（1）熊果酸對神經(jīng)母細胞瘤細胞增殖凋亡及MYCN表達的影響；（2）MYCN與OPN在神經(jīng)母細胞瘤中表達的相關(guān)性研究。
　　第一部分熊果酸對神經(jīng)母細胞瘤細胞增殖凋亡及MYCN表達的影響
　　目的：神經(jīng)母細胞瘤是位居第二的兒童惡性實體腫瘤，已發(fā)現(xiàn)MYCN基因的高表達與預(yù)后密切相關(guān)。研究顯示熊果酸作為中成藥對多種腫瘤有治療作用，但對兒童神經(jīng)母

3、細胞瘤是否有影響尚未報道。本實驗擬應(yīng)用熊果酸作用于體外培養(yǎng)的神經(jīng)母細胞瘤細胞株(SH-SY-5Y)，觀察熊果酸對腫瘤細胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表達的影響。
　　方法：以終濃度為4uM/L、8uM/L、12uM/L的熊果酸作用于神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY-5Y，WST-1法檢測SH-SY-5Y細胞增殖情況，流式細胞術(shù)檢測SH-SY-5Y細胞凋亡情況，采用Real time PCR方法檢測MYCN mRNA的表達情況。

4、>　　結(jié)果：熊果酸對SHSY-5Y細胞增殖的抑制呈明顯的劑量、時間依賴性，隨劑量的增加，作用時間的延長，抑制效果逐漸加強；熊果酸對SH-SY-5Y細胞凋亡的促進呈明顯的劑量依賴性，隨劑量的增加，促進凋亡效果逐漸加強；熊果酸對SHSY-5Y細胞MYCN表達有抑制作用并有明顯的劑量依賴性，隨劑量的增加，抑制效果逐漸加強。12uM/L作用72 h后神經(jīng)母細胞瘤細胞增殖抑制效率達98.3%，MYCN基因mRNA表達抑制率達52.37％。

5、　　結(jié)論：應(yīng)用熊果酸在體外環(huán)境作用SH-SY-5Y細胞，可以有效抑制該細胞的增殖、促進細胞凋亡、抑制原癌基因MYCN mRNA的表達。
　　第二部分 MYCN與OPN在神經(jīng)母細胞瘤中表達的相關(guān)性研究
　　目的：神經(jīng)母細胞瘤是兒童常見的惡性實體腫瘤，研究發(fā)現(xiàn)MYCN在神經(jīng)母細胞瘤中呈高表達。也有報道OPN在多種腫瘤中具有促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展的作用，在兒童神經(jīng)母細胞瘤中也呈高表達，但MYCN與OPN是否有相關(guān)性尚不清楚。本實驗擬應(yīng)

6、用 siRNA抑制神經(jīng)母細胞瘤細胞(SK-N-BE(2))MYCN的表達，觀察 NB細胞OPN mRNA及蛋白的表達變化情況，以了解MYCN與OPN在神經(jīng)母細胞瘤的發(fā)生發(fā)展中是否有相關(guān)性。
　　方法：在四株MYCN表達程度不同的神經(jīng)母細胞瘤細胞株（SK-N-BE(2)、IMR-32、SH-SY-5Y、SK-N-SH)間比較MYCN及OPN mRNA及蛋白表達情況；應(yīng)用siRNA抑制MYCN表達量最高的神經(jīng)母細胞瘤細胞MYCN的表達

7、后，采用Real time PCR及western blot法檢測MYCN及OPN mRNA及蛋白表達。
　　結(jié)果：四株神經(jīng)母細胞瘤細胞株中 MYCN表達高者 OPN表達亦高，其中SK-N-BE(2)細胞株的MYCN及OPN的表達量高于其他細胞株；Real time PCR結(jié)果顯示，siRNA對神經(jīng)母細胞瘤細胞(SK-N-BE(2))MYCN mRNA抑制率為48.05%，OPN的 mRNA表達同時降低46.39%。western