MYCN siRNA納米脂質(zhì)體對神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓、骨轉(zhuǎn)移模型的靶向效應(yīng).pdf

1、目的：建立神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓、骨轉(zhuǎn)移模型，探索以葉酸受體為靶向的納米脂質(zhì)體包裹MYCN基因小干擾性RNA體內(nèi)靶向性，探索以葉酸受體為靶向的納米脂質(zhì)體包裹MYCN基因小干擾性RNA體內(nèi)對瘤組織MYCN mRNA、MYCN蛋白表達(dá)水平及細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：1、4-6周齡雌性BALB/C裸鼠36只，從股骨遠(yuǎn)端向骨髓腔注人神經(jīng)母細(xì)胞瘤LA-N-5細(xì)胞懸液5μl(約1×105個(gè)細(xì)胞)制備神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨、骨髓轉(zhuǎn)移模型，觀察小鼠生存率、腫

2、瘤局部生長及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況。2、4只成功建立神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓、骨轉(zhuǎn)移模型的裸鼠，經(jīng)靜脈給予CY3熒光標(biāo)記的MYCN siRNA納米脂質(zhì)體，劑量為3mg/kg，8h后處死，熒光顯微鏡檢測CY3在體內(nèi)瘤組織及重要器官的熒光強(qiáng)度。3、12只成功建立神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓、骨轉(zhuǎn)移模型的裸鼠隨機(jī)MYCN siRNA組和無關(guān)siRNA組，靜脈分別給予MYCN siRNA納米脂質(zhì)體與無關(guān)siRNA納米脂質(zhì)體，劑量為3mg/Kg/天，連續(xù)給藥5天，于第6天處死

3、，取腫瘤組織，采用熒光定量PCR檢測腫瘤組織MYCN mRNA表達(dá)，Western blot檢測MYCN蛋白表達(dá)，原位細(xì)胞凋亡檢測法(TUNEL)觀察腫瘤細(xì)胞凋亡數(shù)。
　　結(jié)果：1、模型成瘤率100％，LA-N-5細(xì)胞進(jìn)入骨髓腔后抑制正常骨髓細(xì)胞生長，向骨皮質(zhì)侵襲性浸潤，形成骨溶解灶，并向淋巴結(jié)、肝、腎等部位轉(zhuǎn)移。2、CY3熒光標(biāo)記的MYCN siRNA納米脂質(zhì)體給藥8h后熒光主要分布在腫瘤組織內(nèi)，肝臟、腎臟次之，心臟及肺臟及幾乎

4、沒有可見熒光。3、MYCN siRNA組瘤組織中MYCN mRNA的表達(dá)量明顯較無關(guān)siRNA組降低(P<0.05)，同時(shí)MYCN蛋白表達(dá)也下降，MYCN siRNA組凋亡細(xì)胞數(shù)量高于無關(guān)siRNA組(P<0.05)。
　　結(jié)論：1、股骨內(nèi)注射人神經(jīng)母細(xì)胞瘤LA-N-5細(xì)胞懸液可以成功制作裸鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨、骨髓轉(zhuǎn)移模型，后者能較好模擬人神經(jīng)母細(xì)胞瘤在骨骼微環(huán)境中的生長及轉(zhuǎn)歸情況，是研究神經(jīng)母細(xì)胞瘤骨髓、骨轉(zhuǎn)移及評(píng)價(jià)臨床前靶向給藥