抗結(jié)核型化合物的篩選、初步評(píng)價(jià)及表面展示SIV Gag抗原的重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建.pdf

1、本文對(duì)抗結(jié)核型化合物的篩選、初步評(píng)價(jià)及表面展示SIV Gag抗原的重組恥垢分枝桿菌的構(gòu)建進(jìn)行了探討。結(jié)核病(Tuberculosis，TB)是全球危害最大的傳染病之一。耐藥TB的出現(xiàn)及TB與艾滋病病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)共感染使人類對(duì)抗TB新藥的需求更為迫切。然而傳統(tǒng)的抗TB藥物研發(fā)模式所需周期長(zhǎng)、成本高，在長(zhǎng)達(dá)40多年的時(shí)間里，沒有抗TB新藥誕生。本實(shí)驗(yàn)利用新型的抗TB藥物篩選模型，成功

2、的篩選到一種化合物(5k)，在體內(nèi)和體外的評(píng)價(jià)中都表現(xiàn)出良好的殺菌活性。利用該模型，可以在體內(nèi)外連續(xù)檢測(cè)同～樣品，實(shí)驗(yàn)過程中不需要添加任何底物，僅需3-5天便可以對(duì)藥物活性進(jìn)行快速評(píng)價(jià)，靈敏度高，重復(fù)性強(qiáng)。在活性檢測(cè)中:使用無抗性的自主發(fā)光的H37Ra(Selectable Marker-freeAutoluminent Mycobacterium tuberculosis H37Ra，UAlRa)對(duì)一系列化合物進(jìn)行初篩，篩選出包括5k

3、在內(nèi)的數(shù)十個(gè)具有體外殺菌活性的新型化合物;用無抗性自主發(fā)光的H37Rv(Selectable Marker-free Autoluminent Mycobacterium tuberculosisH37Rv，UAlRv)對(duì)這些化合物的殺菌活性做進(jìn)一步驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)5k的體外殺菌效果較好;并且對(duì)于臨床耐藥菌株，5k也有較好的殺菌活性。在體內(nèi)對(duì)于藥物活性的檢測(cè)中，使用不同劑量的5k對(duì)感染UAlRa的BALB/c小鼠進(jìn)行治療，發(fā)現(xiàn)5k在體內(nèi)也表現(xiàn)

4、出較強(qiáng)的殺菌效果，其殺菌效果與藥物劑量呈正相關(guān)性，并且沒有表現(xiàn)出體內(nèi)毒性。初步的體內(nèi)評(píng)價(jià)表明5k有希望成為抗TB新藥。自人類首次發(fā)現(xiàn)艾滋病以來，科研人員一直致力于研發(fā)一種安全有效的HIV疫苗?？蒲腥藛T經(jīng)過30多年潛心研究，提出HIV疫苗需要誘發(fā)機(jī)體多重免疫反應(yīng)。這樣，疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體可以在病毒感染時(shí)中和部分病毒，其后以細(xì)胞免疫應(yīng)答為主的免疫反應(yīng)能夠清除被病毒感染的細(xì)胞，從而降低HIV載量，并減少HIV的傳播效率，達(dá)到預(yù)防與治療的雙重目

5、的。近年來，由于性傳播途徑成為HIV傳播的主要方式，所以能夠誘發(fā)機(jī)體粘膜免疫反應(yīng)的分枝桿菌疫苗載體在疫苗研發(fā)中越來越受到重視。將HIV-1的Env抗原展示在恥垢分枝桿菌（Mycobacteriumsmegmatis，Msmeg）表面，構(gòu)建HIV疫苗，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，該疫苗可以誘發(fā)機(jī)體長(zhǎng)期的粘膜免疫反應(yīng)，并且抗原表達(dá)在表面的免疫效果好于抗原表達(dá)在胞內(nèi)。對(duì)HIV患者體內(nèi)的免疫應(yīng)答和病毒載量進(jìn)行比較，可以發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)針對(duì)Gag的反應(yīng)更強(qiáng)時(shí)，病毒載量才