蛇葡萄素與阿霉素協(xié)同抗腫瘤并逆轉耐藥.pdf

1、目的：觀察蛇葡萄素(Amp)單用或與阿霉素(ADM)聯(lián)用對人紅白血病細胞株K562、小鼠淋巴瘤細胞株YAC-1增殖的抑制作用及與ADM的協(xié)同作用，同時觀察Amp對耐ADM的人紅白血病細胞株K562/ADM耐藥的逆轉作用，初步探討其作用機制。 方法：Amp單用或與ADM聯(lián)用，MTT比色法檢測K562、YAC-1和K562/ADM細胞增殖。流式細胞儀觀察K562/ADM細胞凋亡和P-糖蛋白(P-gp)表達水平的變化；透射電鏡分析K5

2、62/ADM細胞凋亡形態(tài)學變化；激光掃描聚焦顯微鏡(CLSM)測定K562/ADM細胞內Ca2+、Mg2+、ADM濃度、pH值、活性氧和線粒體膜電位的變化。 結果：1.Amp分別對K562、K562/ADM、YAC-1細胞增殖有顯著的時間和濃度依賴性抑制作用。Amp1.56、3.13、6.25mg/L與ADM(0.031～1.0mg/L)聯(lián)用可降低ADM的IC50，協(xié)同抑制K562、YAC-1細胞的增殖。 2.ADM(0

3、.31～10mg/L)單獨或加Amp(1.56、3.13、6.25mg/L)培養(yǎng)48h后，耐藥逆轉倍數(shù)分別為3.79、1.72、2.33；培養(yǎng)72h后，逆轉倍數(shù)分別為4.16、2.32、2.64。 3.對K562/ADM細胞的流式細胞儀測定結果表明，Amp不影響細胞P-gp的表達。細胞凋亡率測定結果，ADM(10mg/L)單用組為6.1％，ADM10mg/L加Amp1.56、3.13或7.25mg/L，使凋亡率分別增加至17.1

4、％、18.6％和15.8％。細胞周期分析表明，ADM可使細胞阻滯于G1期，同時G0期細胞消失；Amp在不影響細胞周期的濃度時，使ADM處理細胞阻滯于G2/M期，而G1期細胞減少。 電鏡觀察表明，經ADM10mg/L、Amp7.13mg/L單獨作用96h后，未出現(xiàn)明顯凋亡特征。經ADM10mg/L+Amp3.56mg/L作用后，K562/ADM細胞出現(xiàn)明顯凋亡形態(tài)學改變。CLSM顯示，ADM10.0mg/L與Amp(3.56、7.

5、13mg/L)聯(lián)合處理K562/ADM細胞，可增加K562/ADM細胞內的ADM含量(P＜0.05)；蛇葡萄素單用或與阿霉素聯(lián)用后，K562/ADM細胞內Mg2+濃度、pH值和活性氧水平無明顯變化。Amp1.78、7.13mg/L與ADM(10mg/L)聯(lián)用時，細胞的線粒體膜電位升高(P＜0.05)。 1.Amp在體外有明顯的抗白血病細胞增殖的活性，并與ADM明顯協(xié)同，逆轉耐藥腫瘤細胞K562/ADM對ADM的耐藥性。

6、2.Amp能增強ADM誘導細胞凋亡的作用。 3.Amp使ADM阻滯562/ADM細胞G1期的作用轉變?yōu)樽铚毎贕2/M期。 4.Amp增強ADM誘導細胞凋亡的機制與細胞內Mg2+、H+和活性氧的變化無關。5.Amp不抑制K562/ADM細胞mdrl/P-gp的表達，其逆轉耐藥與mdrl/P-gp的表達無關。可能通過增加細胞內ADM聚積，抑制P-gp的功能，增強ADM誘導凋亡的作用，從而逆轉K562/ADM細胞的耐藥性。