三嵌段聚合物膠束共轉(zhuǎn)運(yùn)阿霉素和siRNA用于逆轉(zhuǎn)耐藥和協(xié)同抗癌的研究.pdf

1、目的：
　　制備同時(shí)遞送阿霉素和siRNA的共轉(zhuǎn)運(yùn)遞藥系統(tǒng)(siRNA-Dox-micelle)，考察其腫瘤靶向及耐藥逆轉(zhuǎn)，提供一種用于協(xié)同抗腫瘤的新策略。
　　方法：
　?。?）合成N-琥珀酰殼聚糖-聚L賴氨酸-軟脂酸三嵌段聚合物(NSC-PLL-PA)，并在此基礎(chǔ)上制備共轉(zhuǎn)運(yùn)siRNA和Dox膠束(siRNA-Dox-micelle)。
　?。?）考察siRNA-micelle、Dox-micelle和siR

2、NA-Dox-micelle的體外細(xì)胞攝取和亞細(xì)胞分布特性，探究不同阿霉素制劑在細(xì)胞內(nèi)的攝取與消除。
　　（3）從細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積的角度闡明造成不同阿霉素制劑體外藥效學(xué)差異的原因。
　?。?）考察siRNA-micelle的轉(zhuǎn)染效率和siRNA-Dox-micelle的腫瘤靶向性，初步探討P-gp在細(xì)胞間的轉(zhuǎn)移對(duì)化療藥物藥效學(xué)的影響，從逆轉(zhuǎn)耐藥和增強(qiáng)腫瘤靶向方面提高siRNA-Dox-micelle協(xié)同增效的抗腫瘤作用。

3、>　　結(jié)果：
　?。?）通過(guò)縮合法成功地制備了NSC-PLL-PA三嵌段聚合物，N-琥珀酰殼聚糖（NSC）作為親水性外殼用于延長(zhǎng)膠束在血液循環(huán)中的半衰期和降低聚 L-賴氨酸（PLL）的毒性，PLL作為陽(yáng)離子層用以吸附siRNA，軟脂酸(PA)作為疏水層用來(lái)包載阿霉素。該聚合物在水溶液中有很強(qiáng)的膠束化行為，疏水端易于自聚集而壓縮進(jìn)膠束內(nèi)核。制備得到的膠束外觀圓整，粒徑分布均勻，能夠高效包載Dox和siRNA。并且，siRNA-Dox

4、-micelle在pH5.3條件下沒(méi)有在pH7.4條件下穩(wěn)定，易于在酸性條件下釋放所負(fù)載的Dox和siRNA。
　　（2）siRNA-Dox-micelle能同時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)Dox和siRNA，從而使抗癌藥物和基因在同一細(xì)胞內(nèi)共定位。并且隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)的熒光增強(qiáng)，攜帶兩種顏色熒光的細(xì)胞比例增加，抗癌藥物和基因在同一細(xì)胞內(nèi)累積從而更好的發(fā)揮協(xié)同增效的作用；Dox信號(hào)最終由細(xì)胞質(zhì)擴(kuò)散到細(xì)胞核，但siRNA信號(hào)始終定位于細(xì)胞質(zhì)，這有

5、利于他們?cè)诟髯缘陌胁课话l(fā)揮協(xié)同增效的作用。
　　（3）共轉(zhuǎn)運(yùn)膠束能夠一定程度上避開(kāi)外排泵的作用，下調(diào)耐藥細(xì)胞表面P-gp的表達(dá)，增加細(xì)胞內(nèi)阿霉素的濃度，并且細(xì)胞內(nèi)藥物蓄積越多，引起的細(xì)胞毒性越大。
　?。?）siRNA-micelle能夠有效遞送siRNA進(jìn)入靶細(xì)胞沉默P-gp的表達(dá)，但是P-gp能夠在細(xì)胞間轉(zhuǎn)移并保留其生物學(xué)活性，而且，P-gp在細(xì)胞間的傳遞不依賴于mdr1的轉(zhuǎn)錄，一定程度上限制了siRNA-micelle

6、體內(nèi)療效的發(fā)揮；siRNA-Dox-micelle表現(xiàn)出協(xié)同增效的的抗腫瘤活性并能夠明顯改善裸鼠的生存質(zhì)量；并且，siRNA在體內(nèi)能夠有效逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥，一定程度上增強(qiáng)了Dox的抗腫瘤作用。
　　結(jié)論：
　　合成的NSC-PLL-PA三嵌段聚合物能夠高效負(fù)載siRNA和Dox，并且在細(xì)胞內(nèi)有效釋放；制備得到的siRNA-Dox-micelle能夠靶向腫瘤部位，沉默P-gp表達(dá)，逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥，發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤作用，是一種安全有效的