大葉蛇葡萄提取物抗腫瘤活性及其作用機(jī)制研究.pdf

1、大葉蛇葡萄Ampelopsis megalophyllaDiels et. Gilg為葡萄科蛇葡萄屬植物，其藥用部位是葉及嫩莖。因其嫩枝葉置沸水中稍燙后，撈起置通風(fēng)處吹干，表面會(huì)出現(xiàn)白霜，故又稱為霉茶。性平，味酸、澀，具有活血散瘀、止血、清熱解毒等功效。本論文將在前期研究的基礎(chǔ)上，展開大葉蛇葡萄抗腫瘤的活性成分及其作用機(jī)制的研究。
　　課題組前期采用溶劑法將大葉蛇葡萄提取分離為乙醇提取物、石油醚萃取物質(zhì)部位、乙酸乙酯萃取物質(zhì)部位、

2、水溶液物質(zhì)部位，經(jīng)滲漉法和水煎法分別得到總黃酮提取物和水煎液提取物。實(shí)驗(yàn)中選用Hela、SMMC-7721及A549三種腫瘤細(xì)胞進(jìn)行大葉蛇葡萄提取物抗腫瘤活性篩選。結(jié)果表明乙醇提取物、乙酸乙酯萃取物質(zhì)部位及總黃酮提取物為抑制Hela細(xì)胞增殖的主要活性提取物；乙酸乙酯萃取物質(zhì)部位和總黃酮提取物為抑制SMMC-7721細(xì)胞增殖的主要活性提取物；乙醇提取物和乙酸乙酯萃取物質(zhì)部位為抑制A549細(xì)胞增殖的主要活性提取物。選用Hela和SMMC-7

3、721細(xì)胞對(duì)從大葉蛇葡萄中已得到的12種化合物進(jìn)行抗腫瘤活性篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蛇葡萄素、楊梅素、沒食子酸及大黃素是抑制Hela細(xì)胞作用較強(qiáng)的四種化合物；大黃素是抑制SMMC-7721細(xì)胞作用較強(qiáng)的化合物。
　　分別運(yùn)用Hoechst33258染色法、PI染色法、AnnexinV-FITC/PI雙標(biāo)記法、Rh-123染色法及Western blot蛋白質(zhì)免疫印跡學(xué)法，以Hela細(xì)胞為受試對(duì)象，對(duì)蛇葡萄素（AMP）的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)

4、行初步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，AMP能夠抑制Hela細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡，熒光倒置顯微鏡下可見凋亡小體；流式細(xì)胞儀檢測(cè)到AMP使細(xì)胞阻滯在S期，細(xì)胞凋亡率在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量關(guān)系，且線粒體膜電位降低。蛋白質(zhì)免疫印跡圖表明在不同濃度（0，30，40，50，60和70μM）的AMP作用Hela細(xì)胞12 h后，Caspase-3、Caspase-9、bax及Cytc的表達(dá)隨藥物濃度的增高而上調(diào)，bcl-2的表達(dá)隨藥物濃度的增高而下調(diào)，bcl-2