尾加壓素Ⅱ和血管緊張素Ⅱ?qū)ρ苁湛s的協(xié)同作用及其信號機制的研究.pdf

1、尾加壓素Ⅱ(urotensinⅡ，UⅡ)最早是從硬骨魚脊髓尾部分離出來的神經(jīng)環(huán)肽，是迄今為止所知的最強的收縮血管的活性物質(zhì)。UⅡ?qū)ρ艿淖饔糜薪馄蕦W差異和種屬依賴性，并且在不同的生理病理狀態(tài)下對血管的作用不一致。在心血管疾病中，如充血性心力衰竭，心肌梗塞，高血壓，動脈粥樣硬化等疾病中，血漿及局部組織中UⅡ含量升高，并且其它的一些生物活性物質(zhì)，如血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)，內(nèi)皮素1(endothelin，ET-1)

2、，兒茶酚胺類物質(zhì)(catecholamines)含量也升高，說明UⅡ和這些物質(zhì)在疾病的發(fā)生發(fā)展中可能有相關(guān)性。目前已有研究報道UⅡ和oLDL、serotonin對平滑肌細胞的增殖具有協(xié)同作用，可以加速高血壓或高脂血癥病人粥樣斑塊的產(chǎn)生，加速疾病的發(fā)展。所以研究UⅡ與其它生物活性物質(zhì)的相互作用，闡明相互作用的機制，對于進一步揭示UⅡ?qū)π难芗膊〉淖饔脵C制及治療心血管疾病新藥開發(fā)與研究都有重要的意義。 本研究采用體外張力測定等方法，

3、觀察UⅡ和AngⅡ?qū)ρ苁湛s的協(xié)同作用。我們采用低劑量不引起明顯的血管收縮的UⅡ和AngⅡ觀察兩者對大鼠胸主動脈(去除內(nèi)皮)的協(xié)同作用，并且探討協(xié)同作用的機制。結(jié)果我們發(fā)現(xiàn)2nM、3nM的AngⅡ和1nM的UⅡ?qū)ρ艿氖湛s有協(xié)同作用，可以被GPR14阻斷劑urantide和AT1受體阻斷劑Losartan阻斷，也可以被PKC非特異性阻斷劑chelerythrine阻斷。我們進一步研究發(fā)現(xiàn)在協(xié)同作用的血管中磷酸化的PKCα/βⅡ亞型，磷酸

4、化的MLC和磷酸化的PKC底物含量與對照組相比升高，而單獨加入同等劑量的UⅡ和AngⅡ?qū)τ诹姿峄腜KCα/βⅡ，MLC和PKC底物沒有作用。單獨加入高劑量的UⅡ(10nM)可以引起血管明顯的收縮，而且可以激活血管中PKCα/βⅡ、PKCθ亞型以及PKC底物和MLC，也可以被GPR14阻斷劑、PKC阻斷劑chelerythrine阻斷，說明PKC參與了UⅡ縮血管的作用，并且在UⅡ縮血管的不同階段，是不同的PKC亞型起作用的。 為

5、了進一步探討PKC在UⅡ收縮血管中的作用，我們用鈣離子阻斷劑(Methoxyverapamil/thapsigargin)阻斷細胞內(nèi)外的鈣離子，觀察到UⅡ?qū)ρ艿氖湛s作用比對照組減少約50﹪左右，并且可以被PKC阻斷劑chelerythrine阻斷。UⅡ?qū)τ?7周齡自發(fā)性高血壓大鼠(SHR，內(nèi)皮破壞)主動脈的收縮作用強于對照組Wistar-Kyoto(WKY)大鼠，說明UⅡ在不同的病理狀態(tài)下對血管的收縮反應(yīng)不同，具體機制有待于進一步研究

6、。另外，我們還在人和大鼠的平滑肌細胞上觀察到UⅡ?qū)毎灿惺湛s作用，PKC通路也參與了細胞的收縮反應(yīng)。 由于UⅡ在心血管疾病中有重要作用，為了觀察UⅡ?qū)π呐K的作用，我們用免疫沉淀方法證實UⅡ受體GPR14(現(xiàn)已被命名為UT受體)蛋白主要存在左心室，為UⅡ?qū)π呐K的作用提供了直接的證據(jù)。另外，我們還觀察到UⅡ不能引起心肌細胞肥大，可能是由于新生大鼠心肌細胞上UⅡ受體表達較少原因。最后我們構(gòu)建了含有UⅡ受體GPR14的腺病毒載體，為以