痹腫消湯干預活動期類風濕關節(jié)炎患者外周血單個核細胞的蛋白質組學研究.pdf

1、本文的目的是觀察正常人及類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)患者外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells PBMCs)蛋白質的雙向凝膠電泳圖譜，并分析其差異表達的蛋白質，尋找RA疾病相關蛋白，探討RA的發(fā)病機制。觀察痹腫消湯(Bizhongxiao decoction，BZXD)干預前后RA患者PBMCs的差異蛋白質表達，探討B(tài)ZXD治療RA的作用機理。 文

2、中選取18例早期活動期RA患者，隨機分為兩組，一組為治療組(n=9，簡稱BZXD組)，口服痹腫消湯。另一組為對照組(n=9，簡稱MTX組)，予口服甲氨蝶呤(Methotrexate MrX)和普威。9名健康正常成年人為正常對照組。觀察并比較兩組患者治療前后的晨僵(morning stiffness)時間、握力、關節(jié)壓痛數(shù)(Tenderjoint count，TJC)、關節(jié)壓痛指數(shù)(Tenderjoint count index，TJI)

3、、關節(jié)腫脹數(shù)(Swollenjoint count，SJC)、關節(jié)腫脹指數(shù)(Swollen joint count index，SJI)以及治療前后的血沉(erthrocyte sedimentation rate，ESR)，C反應蛋白(C-reactive protein，CRP)，類風濕因子(rheuatoid factor,RF)的變化。用淋巴細胞分離液分離PBMCs，抽提PBMCs中的蛋白，采用固相pH梯度(immobilize

4、d pH gradient，IPG)雙向凝膠電泳(two．dimensional gel electrophoresis，2-DE)分離正常人及RA患者PBMCs總蛋白質。凝膠經考染顯色后，PDQuest圖像分析軟件進行比較分析、識別差異表達的蛋白質，對差異蛋白質點用基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)進行鑒定，然后搜索數(shù)據(jù)庫鑒定部分差異蛋白質點，運用逆轉錄聚合酶鏈式反應(reversetransoftption

5、 polymerase chain reaction，RT-PCR)方法驗證差異表達蛋白。 1.臨床療效觀察：治療三個月后，兩組患者的晨僵、關節(jié)壓痛數(shù)、關節(jié)壓痛指數(shù)、關節(jié)腫脹數(shù)、關節(jié)腫脹指數(shù)、握力等主要癥狀與體征均較前均有顯著改善(p<0.01或<0.05)；但BZXD組在改善關節(jié)壓痛數(shù)、關節(jié)壓痛指數(shù)方面優(yōu)于MTX組(p<0.05)。經治療后，兩組的ESR，CRP等炎性指標較前有明顯降低(p<0.01或p<0.05)；BZXD組

6、的ESR、CRPT降較MTX組更明顯(p<0.05)。BZXD~床顯效率為77.8﹪，總有效率為88.9﹪；MTX組臨床顯效率為55.6﹪，總有效率為77.8﹪；BZXD組總有效率優(yōu)于MTX組(p<0.05)。 2.各組PBMCs總蛋白2-DE圖譜的建立及差異蛋白質識別：分別獲得正常人、RA患者治療前、后PBMCs總蛋白2-DE圖譜，通過比較分析，差異表達蛋白質點數(shù)為23，選取18個點進行質譜鑒定，成功鑒定15個蛋白質，與正常人

7、比較其中8個蛋白質點在RA中表達上調，7個表達下調。與MTX組比較，BZXD組有6個蛋白質表達差異更為明顯。 3.差異蛋白質點質譜鑒定及蛋白功能分類：發(fā)現(xiàn)并鑒定了正常人、RA患者治療前、治療后PBMCs中的差異表達大于2倍的蛋白質點15個。根據(jù)NCBI、MSDB數(shù)據(jù)庫中提供的的信息，這些差異蛋白質的功能涉及物質代謝、能量產生、物質轉運、抗氧化應激、信號轉導及細胞骨架等。其中apolipoprotein A-I、actin，bet

8、a、Talin 1、ATP synthase，phosphatidylethanolamine-binding protein、Prohibitin、Ras related protein、Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K.等蛋白可能與RA病變密切相關。 (4)差異蛋白驗證結果：RT-PCR方法證實ApoA-I在正常組、RA治療組、對照組的表達水平與2-DE結果一致。 研究結論：