纖溶活性化合物FGFC1的藥效學(xué)和毒理學(xué)的研究.pdf

1、血栓疾病是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，由于臨床所使用的溶栓藥物存在對纖維蛋白的特異性不高，半衰期短，且患者們服用藥物后會伴有內(nèi)出血危險等缺點,安全高效低毒的溶栓藥物是研究者們聚焦的焦點。目前天然來源的溶栓活性物質(zhì)的研究已經(jīng)成為開發(fā)未來溶栓藥物的重要趨勢之一。海洋微生物來源的小分子纖溶活性化合物跟傳統(tǒng)的一些溶栓藥物相比，具有安全性好、成本低、來源豐富等優(yōu)點，極有可能開發(fā)為新一代的溶栓劑。本文研究了長孢葡萄穗霉菌FG216（Stachybo

2、trys longispora FG216）產(chǎn)纖溶活性化合物 FGFC1（fungi fibrinolytic compound1，F(xiàn)GFC1）的溶栓效果以及對纖維蛋白活性的影響，在小鼠機體進行一般藥理學(xué)研究，還對纖溶活性化合物FGFC1在Caco-2細(xì)胞中轉(zhuǎn)運特性的研究，最后進行活性化合物FGFC1毒理學(xué)的研究。
　　第一章綜述了血栓疾病主要對人類健康產(chǎn)生的威脅，包括哺乳動物機體血栓形成的基本機制，以及在血液中血栓形成的幾大重要

3、因素，包括血小板、血管因素、血液性質(zhì)、血流流變等。目前溶栓藥物在經(jīng)歷了三代溶栓藥物的研究后,天然來源的溶栓藥物越發(fā)得到研究者們的關(guān)注，例如葡激酶，三七、冬蟲夏草等。在溶栓藥物研究中，藥效學(xué)和毒理學(xué)作為重要的研究手段以及涉及到的常規(guī)研究方法。本研究擬對本實驗室自舟山群島海域海水中分離得到的一株產(chǎn)纖溶活性化合物FGFC1的長孢葡萄穗霉菌FG216的溶血栓作用、纖維蛋白活性測定、一般藥理學(xué)研究、轉(zhuǎn)運特性研究及毒理學(xué)研究，以確定FGFC1的藥效

4、以及對機體毒理作用，為今后纖溶活性化合物FGFC1臨床進一步研究奠定良好的基礎(chǔ)。
　　第二章研究纖溶化合物FGFC1溶血栓藥效作用。基于體外纖溶實驗和體內(nèi)溶血栓實驗來綜合評價FGFC1的溶栓作用。體外纖溶實驗的結(jié)果表明，F(xiàn)GFC1在纖維蛋白平板反應(yīng)體系隨著濃度從5μmol/L增加到50μmol/L，用熒光值評價的纖維蛋白的降解數(shù)量也在增加，添加5μmol/L以上FGFC1反應(yīng)體系纖維蛋白降解數(shù)量能達(dá)到或超過陽性對照pro-uPA5

5、 mmol/L的纖溶程度。在急性大鼠肺血栓栓塞模型中，肺組織切片圖結(jié)果表明添加FGFC1的劑量達(dá)到5mg/kgbw可產(chǎn)生溶栓效果，同時觀察到FGFC1與pro-u-PA具有相同的溶栓效果。
　　第三章研究纖溶活性化合物FGFC1對大鼠纖維蛋白活性的影響。研究對象Wistar大鼠通過尾靜脈注射FGFC1后，采用加鈣法檢測血液優(yōu)球蛋白溶解時間，ELISA試劑盒檢測血液中纖維蛋白原和纖維蛋白原裂解產(chǎn)物的含量，數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析后表明FGFC1

6、處理30min和120min后優(yōu)球蛋白溶解時間被縮短了32S-44S，F(xiàn)GFC1處理組與對照組之間具有顯著差別（p＜0.05），表明纖溶活性化合物FGFC1提高了大鼠血漿中的纖溶活性。血液中纖維蛋白原和纖維蛋白原裂解產(chǎn)物含量測定結(jié)果表明 FGFC1的劑量分別為5mg/kg.bw、10mg/kg.bw和25mg/kg.bw時與對照組相比較，在30min和120 min，均表現(xiàn)出p＞0.05，沒有出現(xiàn)顯著性差異，陽性對照組氯吡格雷硫酸鹽和s

7、cu-PA產(chǎn)生了顯著性差異。
　　第四章研究纖溶活性化合物FGFC1在研究藥物在治療范圍內(nèi)或治療范圍以上劑量時是否存在潛在的不期望出現(xiàn)的會對機體生理功能產(chǎn)生的不良影響。本研究中主要通過觀察受試藥物FGFC1對于心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、運動系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、感覺系統(tǒng)、心血管指數(shù)和動物體重變化的影響，來評價FGFC1對于人的病理生理作用。實驗結(jié)果表明，不同濃度FGFC1（10、19、38、75、150、300kg/mg）對于呼吸系統(tǒng)的觀察

8、，心血管系統(tǒng)無出現(xiàn)異?，F(xiàn)象，對于運動系統(tǒng)（除10 kg/mg組）均有不同程度的運動系統(tǒng)的損傷。對于神經(jīng)系統(tǒng)，除動物出現(xiàn)痛覺反應(yīng)降低外，其他方面均無任何影響。感覺系統(tǒng)中，F(xiàn)GFC1對小鼠胃腸道系統(tǒng)可能產(chǎn)生不良影響。FGFC1對小鼠體重增加有抑制作用，對于心血管指數(shù)無影響。
　　第五章研究纖溶活性化合物FGFC1在Caco-2細(xì)胞模型中吸收和轉(zhuǎn)運特性的研究。采用在Transwell板上培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞，分別在絨毛面（BL側(cè)）和基底

9、面（AP側(cè)）添加受試藥物FGFC1，觀察其排比、總回收率和表觀滲透系數(shù)評價小分子化合物FGFC1的吸收和轉(zhuǎn)運特性。實驗結(jié)果表明FGFC1對照品非諾特羅（Fenoterol）、普萘洛爾（Propranolol）和地高辛（Digoxin）相比，顯示較低的表觀滲透系數(shù)，外排比超過1.5，在轉(zhuǎn)運液HBSS中可穩(wěn)定存在，可能存在外排蛋白機制。
　　第六章研究纖溶活性化合物FGFC1的毒理學(xué)特性。主要包括兩急性毒理學(xué)和遺傳毒理學(xué)兩方面的內(nèi)容，