豬流感病毒的分離鑒定、生物學(xué)特性及HA基因的克隆與序列分析.pdf

1、豬流感病毒在全世界豬群中廣泛存在，是養(yǎng)豬場(chǎng)普遍存在且難以根除的豬呼吸道病之一，不僅給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，而且在公共衛(wèi)生方面也有著十分重要的意義。本研究分離到4株豬流感病毒，并對(duì)其生物學(xué)特性及HA基因變異分析進(jìn)行了研究，為SIV的疫情監(jiān)測(cè)及防控提供依據(jù)。 本研究分離到4株豬流感病毒，分別命名為A/Swine/Henan/01/2008、A/Swine/Henan/02/2008、A/Swine/Henan/03/2008、

2、A/Swine/Henan/04/2008，送哈爾濱獸醫(yī)研究所進(jìn)行血清亞型鑒定，鑒定結(jié)果均為H3N2亞型。RT-PCR法擴(kuò)增NP基因，用DNStar軟件分析，做系統(tǒng)進(jìn)化樹，NP基因全長(zhǎng)為1565bp，編碼520個(gè)氨基酸，分離株間基因序列同源性在99.3％-99.8％之間，均與豬流感H3N2亞型香港分離株的同源性在99.2％-99.7％之間，與其他NP基因的同源性在80.0％-89.9％之間，與歐亞種系中亞洲分離株親源性較近。 本

3、研究對(duì)病毒的血凝素穩(wěn)定性、凝集譜、感染力的熱穩(wěn)定性、耐酸性、細(xì)胞易感性、交叉保護(hù)中和試驗(yàn)以及對(duì)小白鼠、雞和仔豬攻毒試驗(yàn)等病毒生物學(xué)特性進(jìn)行了研究，采用雞胚分離法和PR-PCR法，通過尿囊腔和羊膜腔接種病料，特異性較強(qiáng)，分離率高。分離株血凝性對(duì)熱不穩(wěn)定，反復(fù)凍融時(shí)，病毒的姒效價(jià)降低的比較快；能凝集雞和兔的紅細(xì)胞；對(duì)熱敏感，56℃30min就失去感染力；對(duì)酸、氯仿和乙醚敏感；病毒經(jīng)胰酶處理后，可使其中的一株豬流感病毒感染Vero細(xì)胞，血凝效

4、價(jià)較低；病毒的半數(shù)致死量在10-0.4-10-0.51之間；感染的SPF雞胚全身性出血；感染小白鼠、雞和豬，出現(xiàn)精神不振等臨床癥狀，同居鼠不感染：在感染后第5d和10d檢測(cè)到攻毒小鼠肺內(nèi)病毒的存在，第7d、第14d、21d、28d均能檢測(cè)到HI抗體效價(jià)。 用RT-PCR法克隆A/Swine/Henan/01/2008的HA基因，用DNStar軟件對(duì)其序列與GenBank中收錄的其他豬流感、禽流感和人流感的相關(guān)基因進(jìn)行分析比較并做