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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究從56份臨床癥狀表現(xiàn)為體溫身高,咳嗽,流鼻涕的犬中分離到流感病毒,經(jīng)血凝和血凝抑制試驗(yàn)以及BLAST analysis最終確定為H5N2亞型。根據(jù)Genbank中流感病毒H5N2亞型各個(gè)基因序列,分別設(shè)計(jì)擴(kuò)增各基因片段的特異性引物,用RT-PCR方法擴(kuò)增犬流感病毒(CIV)泰安分離株CA/SD/JT01/09各段基因,并分別將RT-PCR產(chǎn)物克隆入pMD18-T載體,進(jìn)行測(cè)序分析。為了研究H5N2流感病毒在犬中的流行情況,隨后采集
2、并制備了了大量的犬血清進(jìn)行抗體分析,從小部分的犬血清中成功分離得到了H5N2抗體。這表明了H5N2流感病毒能夠在犬中傳播。
CA/SD/JT01/09 HA基因長(zhǎng)度為1467bp,編碼466個(gè)氨基酸,HA蛋白切割位點(diǎn)序列為PQ↓REIRRK,屬于非高致病性毒株;分離段HA 含有4個(gè)氨基酸糖基化位點(diǎn),分別為181-NNTD-,209-NPTT-,302-NSSM-,500-NGTY-,其中3個(gè)在HA1蛋白上,1個(gè)在HA2蛋白
3、上,與個(gè)別參考毒株糖基化位點(diǎn)個(gè)數(shù)不同。CA/SD/JT01/09 HA蛋白在45、184、444位發(fā)生了氨基酸突變,但沒(méi)有發(fā)生在HA重要的受體結(jié)合部位,其抗原性及其生物特性未發(fā)生變化;CA/SD/JT01/09 NA蛋白基因長(zhǎng)為1172bp,編碼388個(gè)氨基酸,包含4個(gè)氨基酸糖基化位點(diǎn),其中第50和338位發(fā)生了氨基酸突變,導(dǎo)致NA頸部50位由V突變?yōu)锳,可以推測(cè)對(duì)病毒的復(fù)制能力和宿主范圍會(huì)產(chǎn)生一定的影響。NP基因分離長(zhǎng)度為1594bp
4、,編碼499個(gè)氨基酸,其中與MD/Ita/36/2002(H5N3)的NP基因同源性最高,達(dá)到97%,分離毒株在339、376、461位的氨基酸分別為R、N、A,參考毒株為C、D、D。犬流感病毒CA/SD/JT01/09其余基因序列PB2、PB1、PA、M、NS片段擴(kuò)增長(zhǎng)度分別2174、2134、2062、1027、890,分別編碼724、711、687、252、226個(gè)氨基酸,各個(gè)片段基因序列與參考毒株最高同源性都大于90%。
5、 系統(tǒng)發(fā)生分析表明,流感病毒CA/SD/JT01/09氨基酸序列與參考序列最大同源性均大于93.3%;其中HA基因與SW/FJ/F1/01(H5N1)的同源性最高,屬于亞洲禽類(lèi)譜系。NA蛋白與TK/WS/66(H9N2)同源性最高,親緣關(guān)系最近,經(jīng)分析表明NA基因?qū)儆谠缙诒泵狼蓊?lèi)譜系。NP蛋白與SW/FJ/F1/01(H5N1)同源性最高,親緣關(guān)系最近,屬于歐洲譜系。其余片段均與SW/FJ/F1/01(H5N1)同源性最高,親緣關(guān)
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