豬圓環(huán)病毒2變異株的鑒定與生物學(xué)特性研究.pdf

1、2006年暴發(fā)于華東并蔓延至全國(guó)的“豬高熱綜合征”是一種發(fā)病率和死亡率較高的疾病，病豬表現(xiàn)為發(fā)熱、食欲不振或無食欲、呼吸困難、喘氣、腹式呼吸等癥狀。全面了解該病的病因?qū)τ谟行Э刂埔咔轱@得非常重要。本研究利用無PCV污染的PK—15細(xì)胞對(duì)來自浙江的疑似豬“高熱癥”患豬的腹股溝淋巴結(jié)進(jìn)行了豬圓環(huán)病毒2的鑒定和生物學(xué)特性測(cè)定。
　　 采用PCV2特異性的PCR的方法，檢測(cè)了43份臨床上疑似豬“高熱癥”患豬的腹股溝淋巴結(jié)，12份病料為P

2、CV2核酸陽性。然后將這12份陽性病料接種無PCV污染的PK—15細(xì)胞，得到了7株P(guān)CV2病毒，新分離的毒株2～4代就能夠在PK—15細(xì)胞上穩(wěn)定生長(zhǎng)。分別以直接來自PCV2檢測(cè)陽性的病料和適應(yīng)PK—15細(xì)胞的PCV2為DNA為模板，擴(kuò)增PCV2全基因組，DNA序列測(cè)定顯示，5株P(guān)CV2的基因組序列由1767個(gè)核苷酸組成(1767PCV2)，2株P(guān)CV2的基因組序列由1766個(gè)核苷酸組成(1766PCV2)。直接來自病料與細(xì)胞分離毒的核苷

3、酸同源性為100％。同源性分析顯示，PCV2分離毒株與參考株的同源性介于93.3～99.8％之間、與PCV1參考株的同源性為76.7～77.8％。分離毒株ORF1之間的核苷酸同源性為97.8％～99.8％，但ORFl突變多為無義突變。新分離毒株ORF2之間的同源性為98.1％～99.7％。兩株1766的同源性是99.7％，他們與1767的同源性是98.5％～99.7％。復(fù)制能力測(cè)定顯示，1766PCV2在PK—15細(xì)胞的復(fù)制能力比176

4、7PCV2高10倍以上。單克隆抗體表位分析顯示，1766PCV2衣殼蛋白的C末端擁有1個(gè)不被1767PCV2衣殼蛋白單克隆抗體識(shí)別的表位。這些結(jié)果充分證明1766PCV2是新出現(xiàn)的、具有高復(fù)制能力的PCV2變異株。1767PCV2是目前的主流基因型病毒。
　　 分別用1767PCV2和1766PCV2毒株，以不同的劑量感染8周齡的Balb/c雌性小鼠，于接種后不同時(shí)間采集外周血和捕殺，采集小鼠腦、心、肝、脾、肺、腎、胰、胃、十二

5、指腸和結(jié)腸等組織，進(jìn)行病理組織學(xué)、病毒血癥、病毒再分離、細(xì)胞因子分析。結(jié)果表明，PCV2感染Balb/c小鼠后，沒有明顯的臨床癥狀，但可至輕微的顯微病理損傷，引起小鼠脾臟中IL—2、IL—4、IFN—γ和IκB顯著下調(diào)，IL—6、IL—10上調(diào)。但就IL—6而言，1767PCV2在低劑量感染時(shí)抑制脾臟中IL—6轉(zhuǎn)錄，高劑量感染時(shí)促進(jìn)脾臟中IL—6轉(zhuǎn)錄；1766PCV2在低劑量和高劑量感染時(shí)都促進(jìn)脾臟中IL—6轉(zhuǎn)錄。綜合分析顯示：PCV2