2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩74頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、研究背景
  蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化修飾是真核細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的一種重要調(diào)控,動(dòng)態(tài)可逆的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化程度由蛋白質(zhì)酪氨酸激酶(PTK)和蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(PTP)協(xié)同調(diào)控。PTP在許多生理過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用,調(diào)控細(xì)胞的增殖分化、遷移、細(xì)胞內(nèi)代謝、免疫應(yīng)答和神經(jīng)活動(dòng)等。異常的PTP活力可能引發(fā)多種人類疾病,如癌癥或者糖尿病。PTP1B在胰島素信號通路中起負(fù)調(diào)控作用,其活性異常與糖尿病發(fā)生有關(guān)。YopH是耶爾森菌逃避宿主先天免疫應(yīng)答的

2、重要因子;紋狀體富集蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶(Striatal enriched tyrosine phosphatases,STEP)作為一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)特有的磷酸酶,對突觸的可塑性、神經(jīng)元的生存等具有重要調(diào)節(jié)作用。STEP功能失調(diào)有可能導(dǎo)致包括阿爾茲海默癥在內(nèi)的多種神經(jīng)系統(tǒng)退行性性疾病。目前,PTP作為潛在的藥物靶標(biāo)日益引起關(guān)注。特異性調(diào)控PTP的小分子化合物不僅是應(yīng)用于開發(fā)臨床藥物的希望所在,也可作為特定的活性探針來研究并闡明PTP在細(xì)

3、胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮的重要作用。因此發(fā)展高效的小分子探針并深入研究其作用機(jī)制具有重要意義。
  研究目的
  通過獲得純化的STEP、LYP、PTP1B、YopH和MEG2蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶進(jìn)行酶學(xué)分析及小分子抑制劑活性篩選的研究。
  材料與方法
  將STEP、LYP、PTP1B、YopH和MEG2蛋白磷酸酶野生型序列亞克隆到pET-15b、pET-28a和pET-22b等表達(dá)載體上,隨后轉(zhuǎn)化至E.coli B

4、L21工程菌中表達(dá),通過親和層析和凝膠阻滯層析等技術(shù),獲得純化的STEP、LYP等磷酸酶,并以pNPP為底物對其進(jìn)行體外酶活測定,并運(yùn)用連續(xù)讀數(shù)法、IC50半抑制效率測定法、抑制劑酶動(dòng)力學(xué)測定進(jìn)行抑制劑篩選,隨后通過測定抑制劑對其他磷酸酶PPM家族的選擇性揭示化合物是否具有特異性,確定化合物的作用。
  結(jié)果
  實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明STEP、YopH、MEG2等磷酸酶蛋白表達(dá)成功,并可經(jīng)純化活動(dòng)純度超過90%的酶用于體外酶學(xué)實(shí)驗(yàn)。

5、純化后的STEP、YopH、MEG2等磷酸酶SDS-PAGE電泳表觀分子量分別為35 kDa、33 kDa、38 kDa等。隨后,根據(jù)對STEP等磷酸酶基本酶活分析,又從化合物庫中篩選出1種具明顯抑制作用且結(jié)構(gòu)新穎的抑制劑,小分子化合物E4以時(shí)間和濃度依賴性的方式抑制了STEP蛋白活性。進(jìn)一步研究表明,化合物E4以時(shí)間依賴性方式抑制一系列PTP,而其較少抑制或沒有抑制金屬依賴性蛋白磷酸酶。
  結(jié)論
  在這里,我們將化合物

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論