基于STAT3信號(hào)研究健脾和胃法對(duì)人食管癌EC-9706細(xì)胞生存的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)研究六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物對(duì)人食管癌EC-9706細(xì)胞增殖、凋亡、分泌細(xì)胞因子 IL-6、TGF-β1、VEGF及STAT3信號(hào)的調(diào)控作用，初步探討健脾和胃法對(duì)腫瘤細(xì)胞生存的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　70％乙醇提取六君子湯和啟膈散后，經(jīng)乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到70%乙醇部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位，經(jīng)過(guò)不同藥物濃度（125，250，500，1000μg/

2、ml）作用于EC-9706細(xì)胞的篩選，選取乙酸乙酯部位作為有效部位；六君子湯乙酸乙酯部位(6.25～200μg/ml)、啟膈散乙酸乙酯部位（12.5～200μg/ml）培養(yǎng) EC-9706細(xì)胞48h后，MTT法檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖的抑制情況，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況；用激光共聚焦顯微鏡觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)變化及凋亡小體；ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子因子-β1（TGF-β1）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（V

3、EGF）的分泌情況；采用Western Blot法檢測(cè)細(xì)胞中STAT3和p-STAT3的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位對(duì) EC-9706細(xì)胞的抑制效果均明顯優(yōu)于70%乙醇部位、正丁醇部位和水部位。
　　2.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位分別作用于 EC-9706細(xì)胞48 h，OD值均比對(duì)照組有不同程度的降低，且抑制率隨濃度增高而增高，呈劑量-效應(yīng)關(guān)系（P＜0.05）。
　　3.流式

4、細(xì)胞術(shù)測(cè)定細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物的低、中、高三個(gè)濃度組，凋亡率明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　4. ELISA法檢測(cè)結(jié)果顯示，在對(duì)照組細(xì)胞上清中三種因子的含量最多，六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位的低中兩個(gè)濃度均對(duì)細(xì)胞分泌因子有一定的抑制作用。六君子湯低中濃度組均降低了細(xì)胞上清IL-6、TGF-β1、VEGF含量（P＜0.01）。啟膈散低中濃度組降低了IL-6、TGF-β1含量（P＜0

5、.01）；與對(duì)照組比較，啟膈散低濃度組對(duì)VEGF的含量有輕微抑制作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；中濃度組明顯降低了VEGF的含量（P＜0.01）。同水平濃度下，啟膈散中、低濃度組對(duì)IL-6水平的抑制效果優(yōu)于六君子湯（P＜0.01）；對(duì)VEGF水平的抑制效果，啟膈散中濃度組優(yōu)于六君子湯（P＜0.01），而兩方低濃度組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；兩方對(duì)TGF-β1的水平影響無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　5. Western

6、Blot結(jié)果顯示，六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位低、中濃度組作用EC-9706細(xì)胞48h后，均下調(diào)了STAT3和p-STAT3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)論:
　　1.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物能抑制 EC-9706細(xì)胞的體外增殖，其抑制作用呈劑量-效應(yīng)關(guān)系。
　　2.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位能降低EC-9706細(xì)胞上清中IL-6、TGF-β1、VEGF水平。
　　3.六君子湯和啟膈散乙酸乙酯部位提取物抑制EC