人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞裂解液對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞中uPA、MMP-2的影響.pdf

1、背景：食管癌是消化道常見的惡性腫瘤，發(fā)病率高，占世界惡性腫瘤中第八位，在中國(guó)居第四位。盡管人們對(duì)其進(jìn)行了長(zhǎng)期的研究，包括手術(shù)切除、化學(xué)治療及放射治療等一系列的治療方案，但其5年生存率仍僅為15％。導(dǎo)致食管癌術(shù)后死亡率高的原因很多，術(shù)后轉(zhuǎn)移是重要的原因之一。
　　尿激酶型纖溶酶原激活物（urokinase plasminogen activator，uPA）能激活纖溶酶及其他多種蛋白溶解酶。它們?cè)谀[瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中也具有促進(jìn)作用

2、，因?yàn)榭梢越到庾璧K細(xì)胞轉(zhuǎn)移的天然屏障細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)等，給腫瘤細(xì)胞清除了轉(zhuǎn)移過(guò)程中的阻力?；|(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）具有降解ECM，破壞基膜（basement membranae，BM）完整性的酶系統(tǒng)，在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中起著非常關(guān)鍵的作用。實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（humanumbilical cord mesenchymal s

3、tem cells，hUCMSCs）裂解液對(duì)食管癌細(xì)胞EC9706的增殖和遷移均有抑制作用。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)是探索hUCMSCs裂解液對(duì)食管癌EC9706細(xì)胞中uPA、MMP-2的表達(dá)的影響。為進(jìn)一步研究抑制作用機(jī)理奠定理論基礎(chǔ)。為臨床應(yīng)用干細(xì)胞抑制食管癌腫瘤轉(zhuǎn)移的治療方法提供理論依據(jù)。
　　方法：1.培養(yǎng)食管癌EC9706細(xì)胞;2.采用組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)hUCMSCs，待細(xì)胞傳至第3代后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表型;3.收集

4、hUCMSCs，用反復(fù)凍融法制備hUCMSCs裂解液;4.各個(gè)組擁有相同數(shù)量的食管癌EC9706細(xì)胞，向每組加入不同數(shù)量的hUCMSCs裂解液，然后培養(yǎng)60h。使用Western-blot法檢測(cè)食管癌EC9706細(xì)胞中uPA、MMP-2的表達(dá)變化。
　　結(jié)果食管癌細(xì)胞EC9706在倒置顯微鏡下觀察其呈多邊形，形態(tài)多樣，細(xì)胞核質(zhì)比較大，細(xì)胞核形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞群體排列不規(guī)則。
　　hUCMSCs組織塊培養(yǎng)法原代培養(yǎng)7-12d后，

5、顯微鏡下可見梭形或多角形成纖維細(xì)胞。隨后可以發(fā)現(xiàn)hUCMSCs呈成纖維狀，漩渦狀排列。流式細(xì)胞儀分析第3代hUCMSCs可檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)組各組細(xì)胞CD90、CD166等MSCs標(biāo)志物高表達(dá)，不表達(dá)造血細(xì)胞表面特異性標(biāo)志CD34、CD45。
　　當(dāng)用hUCMSCs裂解液處理過(guò)食管癌EC9706細(xì)胞后，uPA在對(duì)照組中的表達(dá)為0.28075±0.00233，在1/2倍組中的表達(dá)為0.28790±0.00176，在1倍組中的表達(dá)為0.137

6、82±0.00542，在2倍組中的表達(dá)為0.12465±0.01277。MMP-2在對(duì)照組中的表達(dá)為0.27051±0.01956，在1/2倍組中的表達(dá)為0.26698±0.00231，在1倍組中的表達(dá)為0.13017±0.01529，在2倍組中的表達(dá)為0.11755±0.00982。當(dāng)加入hUCMSCs數(shù)小于食管癌細(xì)胞數(shù)的裂解液時(shí)uPA、MMP-2的表達(dá)變化不明顯（P＞0.05），當(dāng)加入hUCMSCs數(shù)大于或等于食管癌細(xì)胞數(shù)的裂解液時(shí)