祛風(fēng)化痰解毒方及其拆方調(diào)節(jié)食管癌EC9706細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察不同制備方法所得的祛風(fēng)化痰解毒方及其拆方：祛風(fēng)方、化痰方、解毒方對(duì)人食管癌細(xì)胞 EC9706增殖的抑制、細(xì)胞周期及蛋白 PLCγ1、PKCα、PI3K的影響，研究活血、解毒、化痰的方法治療食管癌的機(jī)理，尋求有效的的藥物制備方法，探討“風(fēng)邪、痰、毒”與食管癌發(fā)生的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法：備選中藥分別采用采用醇提法和水煮醇沉的方法制備藥物，用 MTT法篩選出各藥物及不同的制備方法對(duì)人食管癌細(xì)胞 EC9706抑制的影響

2、，選出抑制率較高且出膏率高的藥物，根據(jù)《中藥學(xué)》藥物功效初步分為祛風(fēng)方、化痰方、解毒方；運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選出最佳的藥物組合；分別用祛風(fēng)方、化痰方、解毒方及祛風(fēng)化痰解毒合方作用于細(xì)胞EC9706，在倒置顯微鏡下觀察各組對(duì)其生長(zhǎng)狀態(tài)和增殖的影響；采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期的作用及影響；用 Wertern blot測(cè)試活血方、解毒方、化痰方及合方組對(duì)食管癌細(xì)胞 EC9706中PLCγ1、PKCα、PI3K蛋白表達(dá)的影響。

3、　　結(jié)果：①備選藥物中出膏率較高且利用 MTT法檢測(cè)出對(duì)人食管癌細(xì)胞 EC9706抑制作用明顯且藥效明顯的有水煮醇沉法制備的常山、蟾皮，醇提法制備的蟬蛻、土荊皮、皂角、斑蝥，出膏率依次為蟾皮＞皂角＞斑蝥＞土荊皮＞常山＞蟬蛻，抑制作用大小排列依次為常山皂角＞常山＞蟾皮＞斑蝥＞蟬蛻＞土荊皮。②依據(jù)藥物篩選結(jié)果和藥物功效，對(duì)藥物初步擬定為祛風(fēng)方、化痰方、解毒方，根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得出最佳組合的祛風(fēng)化痰解毒全方。③祛風(fēng)化痰解毒方及其拆方干預(yù)人食管

4、癌細(xì)胞EC9706，在倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn)各組藥物對(duì)細(xì)胞的形態(tài)改變明顯；各組藥物不同的劑量和作用時(shí)間對(duì)細(xì)胞的抑制作用不同，存在劑量依賴性和時(shí)間效應(yīng)關(guān)系，抑制作用大小依次為化痰解毒活血方＞化痰方＞解毒方＞祛風(fēng)方。④各治法組 G0/G1期細(xì)胞比率均有所下降，祛風(fēng)組下降顯著；各藥物組的S期細(xì)胞比率均有下降，其中祛風(fēng)組和解毒下降比率較大；各藥物組 G2/M期細(xì)胞比率升高，其中祛風(fēng)組 G2/M期細(xì)胞比率升高顯著，⑤用 Wertern blot可以

5、檢測(cè)到人食管癌細(xì)胞 EC9706中PLCγ1、PKCα、PI3K蛋白呈高表達(dá)狀態(tài)，使用祛風(fēng)方、化痰方、解毒方、全方干預(yù)細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)各方對(duì)高表達(dá)蛋白有不同程度的抑制作用，其中全方效果最為顯著，化痰方次之，解毒方較低。
　　結(jié)論：①祛風(fēng)化痰解毒方及其拆方能顯著地抑制食管癌細(xì)胞的增殖，祛風(fēng)、化痰、解毒藥物相互配伍可以協(xié)同并增強(qiáng)抑制食管癌細(xì)胞的增殖。②化痰組和全方組將細(xì)胞阻滯在 G1/G0期，解毒組和祛風(fēng)組將細(xì)胞阻滯在 G2/M是抑制食管癌