清熱燥濕解毒活血方及其拆方調(diào)節(jié)人結(jié)腸癌細(xì)胞RKOPLCγ1介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)研究.pdf

1、目的：
　　從臨床治療結(jié)腸癌常用的中藥中篩選出抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞生長的有效中藥組成方劑，觀察該方對結(jié)腸癌細(xì)胞的抑制作用，探討清熱燥濕解毒活血方及其拆方對結(jié)腸癌的作用機(jī)制和中醫(yī)病機(jī),為結(jié)腸癌治療提供有效的中醫(yī)方劑。
　　方法：
　　對1979年6月～2014年3月中國期刊數(shù)據(jù)庫（CNKI）收錄的中醫(yī)診治結(jié)腸癌的文獻(xiàn)，通過頻度分析總結(jié)出250味中藥作為初篩的具體藥物，用95％乙醇浸泡一周，第7天開始制備中藥醇提物，以100μ

2、g/ml藥物濃度處理人結(jié)腸癌RKO細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察結(jié)腸癌細(xì)胞RKO的形態(tài)學(xué)變化，48小時(shí)后，運(yùn)用MTT比色法篩選出對結(jié)腸癌RKO細(xì)胞有明顯抑制作用的藥物，用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選出最佳組合藥物并組成有效方劑，流式細(xì)胞術(shù)觀察該方及其拆方對RKO細(xì)胞周期的作用，并用Western blot方法分析該方及其拆方對RKO細(xì)胞PLCγ1介導(dǎo)的信號蛋白表達(dá)的影響，探討結(jié)腸癌發(fā)生的中醫(yī)病機(jī)與RKO生長信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的關(guān)系，尋找治療結(jié)腸癌的有效方藥。
　

3、　結(jié)果：
　　1、清熱燥濕解毒活血方及拆方對結(jié)腸癌細(xì)胞RKO的生長有明顯抑制作用，與空白對照組比較，各治法組對細(xì)胞形態(tài)均有較大影響。清熱解毒組細(xì)胞明顯變小，增殖速度緩慢，細(xì)胞數(shù)目減少，排列稀疏。清熱燥濕組細(xì)胞形態(tài)變小，數(shù)目減少。行氣活血組細(xì)胞形態(tài)呈長梭形，數(shù)目有所減少。全方組細(xì)胞形態(tài)變小，細(xì)胞間質(zhì)增大，數(shù)目減少顯著。
　　2、清熱燥濕解毒活血方及其拆方均能有效抑制細(xì)胞RKO的生長，全方組抑制作用最強(qiáng)，抑制率隨藥物濃度、時(shí)間的

4、增加而增高，對細(xì)胞生長的抑制呈現(xiàn)劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)的依賴關(guān)系。
　　3.清熱燥濕解毒活血方及其拆方對RKO細(xì)胞周期有明顯的影響，G1期數(shù)值持續(xù)增高，S期無明顯數(shù)值的變化，G2期數(shù)值降低。說明清熱燥濕解毒活血方及其拆方將細(xì)胞RKO阻滯于G2期，從而起到抑制細(xì)胞生長的作用。
　　4、人結(jié)腸癌細(xì)胞RKO可檢測到EGFR、PLCγ1、PKCα蛋白分子不同程度的超量表達(dá)。
　　5、用 IC50藥物濃度作用細(xì)胞時(shí)，清熱解毒燥濕

5、活血方及拆方能有效的抑制EGFR、PLCγ1、PKCα信號通路各個(gè)蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)論：
　　1、清熱燥濕解毒活血方及其拆方對人結(jié)腸癌 RKO的生長均有抑制作用，全方組效果最好，清熱解毒、清熱燥濕、行氣活血幾法具有協(xié)同效應(yīng)。
　　2、清熱燥濕解毒活血方對人結(jié)腸癌RKO的抑制具有劑量和時(shí)間依賴性作用。
　　3、清熱燥濕解毒活血方及其拆方將細(xì)胞 RKO阻滯于 G2期，從而起到抑制細(xì)胞生長的作用。
　　3通過