Ri質(zhì)粒介導(dǎo)紫錐菊的遺傳轉(zhuǎn)化及其毛狀根中次生代謝產(chǎn)物的含量分析.pdf

1、紫錐菊是菊科松果屬植物。原產(chǎn)北美州，為北美傳統(tǒng)草藥，主要含有多糖、總酚和烷基酰胺等藥用成分。紫錐菊藥物具有增強(qiáng)人體免疫力的功效，為近年來歐洲和北美最流行的免疫制劑。紫錐菊藥物的研究開發(fā)在我國將有廣闊的市場前景。 我國近年來在上海、北京、南京等地有所引種，雖引種成功，但受氣候、土壤等條件的影響，其紫錐菊生物活性成分含量極低，藥用品質(zhì)也難以保證。如何利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段或方法，解決此難題，這也是本課題的立題目的。本課題的研究將為中藥

2、材的大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)開拓另一途徑，也為獲得其有效的次生代謝產(chǎn)物提供一種新方法，對我國中藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展以及中藥現(xiàn)代化具有極其重要的意義。 本文以加拿大紫錐菊種子為材料，利用植物生理學(xué)、分子生物學(xué)，藥物分析學(xué)等學(xué)科交叉的實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)手段，建立了紫錐菊快繁體系和發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)紫錐菊藥用植物的遺傳轉(zhuǎn)化，并對紫錐菊毛狀根中次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行了初步的含量分析。實(shí)現(xiàn)了通過紫錐菊毛狀根誘導(dǎo)培養(yǎng)體系生產(chǎn)次生代謝的初步研究。本文的主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下

3、。 (1) 為了獲得紫錐菊遺傳轉(zhuǎn)化的材料，利用加拿大紫錐菊種子萌發(fā)獲得紫錐菊無菌苗，進(jìn)行紫錐菊的組織培養(yǎng)，建立紫錐菊快繁培養(yǎng)體系。紫錐菊種子通過破壞種皮的方法，其誘導(dǎo)發(fā)芽率可從未處理的33％提高到64％，紫錐菊無菌葉片在MS+IBA（0.4 mg/L）+BA（0.1 mg/L）的培養(yǎng)基上形成黃綠色愈傷組織。在MS+BA（0.3 mg/L）+IBA(0.4 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)和MS+BA（0.3 mg/L）+I

4、BA(0.5 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)的培養(yǎng)基中，愈傷組織分化出不定芽。不定芽在MS培養(yǎng)基中可以生根，長成健康植株。 (2) 利用A4、R1601、R1000三種發(fā)根農(nóng)桿菌誘導(dǎo)紫錐菊的遺傳轉(zhuǎn)化，建立紫錐菊毛狀根誘導(dǎo)體系。紫錐菊外植體被A4、R1601、R1000三種發(fā)根農(nóng)桿菌感染后，20d后，外植體傷口處陸續(xù)分化生長出白色的毛狀根。毛狀根密集生長、分枝多，且向上生長。A4菌株的誘導(dǎo)效果明顯好于其他兩種菌株，A4對紫