NB-UVB對角質(zhì)形成細胞角蛋白17表達的調(diào)控作用及其機制研究.pdf

1、目的銀屑病是一種臨床常見的易復發(fā)的慢性炎性皮膚病,其發(fā)病率較高,全球發(fā)病率約為0.1-4.0％。目前銀屑病的發(fā)病機制尚不十分明確,與環(huán)境和遺傳等多種因素有關。以往研究發(fā)現(xiàn)銀屑病相關角蛋白17(K17)在銀屑病皮損區(qū)呈特異性高表達,并且通過“K17-T細胞-細胞因子”自身免疫環(huán)路的形式參與銀屑病的發(fā)病和疾病的進展。窄譜中波紫外線(NB-UVB)是臨床常用的治療銀屑病的方法,具有安全、有效、副作用小的特點。NB-UVB治療銀屑病的作用機制可

2、能與誘導T細胞凋亡有關,但NB-UVB對表皮角質(zhì)形成細胞的具體作用,尤其對K17表達的影響尚不清楚,本研究通過體內(nèi)及體外實驗探討不同劑量NB-UVB對角質(zhì)形成細胞K17表達的調(diào)控作用及其機制。
　　方法：不同劑量 NB-UVB照射角質(zhì)形成細胞細胞系,照射后培養(yǎng)12h用AnnexinV/PI檢測細胞凋亡,照射后6、12、24h用CCK8法測定細胞活性,透射電鏡觀察細胞骨架變化,Real-time PCR和Western-blot用于

3、檢測K17 mRNA和蛋白表達影響以及其對ERK1/2、STAT3、STAT1、P38、AKT、P65磷酸化活性的影響;分離培養(yǎng)原代角質(zhì)形成細胞,采用熒光實時定量PCR、Western印跡以及K17免疫熒光等方法對以上結(jié)果進行驗證;采用咪喹莫特誘導銀屑病樣皮炎小鼠模型,H&E染色檢測不同劑量NB-UVB照射后表皮病理變化,熒光實時定量PCR、Western印跡、K17免疫熒光和免疫組化檢測NB-UVB對小鼠表皮組織K17 mRNA和蛋白

4、表達的影響。
　　結(jié)果：細胞凋亡檢測發(fā)現(xiàn)角質(zhì)形成細胞耐受NB-UVB劑量范圍為0-400mJ/cm2,該劑量范圍內(nèi)進一步行細胞增殖實驗,發(fā)現(xiàn)低劑量(100mJ/cm2)NB-UVB照射可以促進角質(zhì)形成細胞的增殖和K17表達,而高劑量(400 mJ/cm2)NB-UVB照射則具有抑制細胞增殖和K17表達的作用,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05和P<0.05)。通過對NB-UVB照射后相關信號通路進行篩查,發(fā)現(xiàn)100 mJ/cm2 NB

5、-UVB照射可以上調(diào)角質(zhì)形成細胞 ERK1/2、STAT3的磷酸化水平,而400mJ/cm2 NB-UVB照射后ERK1/2、STAT3的磷酸化水平明顯下降,阻斷這一信號通路可以抑制低劑量NB-UVB對K17的上調(diào)。不同劑量NB-UVB照射對原代角質(zhì)形成細胞K17表達影響與HaCaT細胞系結(jié)果一致;動物實驗篩選出BALB/C小鼠NB-UVB的最小紅斑量(MED)為350mJ/cm2,分別予低劑量(100mJ/cm2隔日一次)和高劑量(3

6、00mJ/cm2為初始照射劑量,隔日照射一次,每次增加50mJ/cm2,累計劑量1500 mJ/cm2)NB-UVB照射,高劑量NB-UVB照射后表皮角化過度、角化不全等病理變化得到改善,K17表達明顯減低,低劑量NB-UVB照射對皮損改善和K17表達無明顯影響。
　　結(jié)論：低劑量NB-UVB照射可刺激角質(zhì)形成細胞增殖和K17表達,而較高劑量NB-UVB照射則抑制細胞增殖和K17表達,低劑量NB-UVB引起K17表達的上調(diào)現(xiàn)象受到

7、ERK1/2及STAT3通路的調(diào)控,而高劑量NB-UVB則抑制ERK1/2及STAT3的活化,引起K17表達的進一步降低,不同劑量NB-UVB照射可引起角質(zhì)形成細胞截然相反的生物學行為改變,這一現(xiàn)象與信號通路的狀態(tài)相關。臨床NB-UVB治療銀屑病常以最小紅斑量的50-70%為起始劑量,當NB-UVB大于臨床起始照射劑量,可以抑制細胞增殖及K17表達,而低于臨床起始照射劑量時,不能起到抑制細胞增殖和K17表達的作用,與本研究實驗結(jié)果一致。