環(huán)氧合酶在UVB誘導(dǎo)黑素細(xì)胞樹突形成中的作用及其機制研究.pdf

1、人體皮膚顏色多樣，主要是由表皮細(xì)胞中的色素沉著決定的。色素沉著是一個復(fù)雜而精密的多步驟過程，目前研究認(rèn)為主要可以分為四步，首先是黑素在黑素細(xì)胞中的黑素小體內(nèi)合成，接著是由核周沿著樹突延伸的方向向遠(yuǎn)端運輸，然后是向周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)運，最后在角質(zhì)形成細(xì)胞中再分布、降解。黑素小體由核周向樹突遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移至周圍的角質(zhì)形成細(xì)胞的過程被人們稱為黑素小體的轉(zhuǎn)運。
　　在色素沉著的過程中，黑素合成固然重要，但黑素小體轉(zhuǎn)運也必不少的。樹突不僅是

2、黑素細(xì)胞的形態(tài)學(xué)標(biāo)志，更重要是黑素小體轉(zhuǎn)運的中介點，其數(shù)量及形態(tài)的變化在黑素轉(zhuǎn)運中起著極為重要的作用，調(diào)控樹突的形成可以對色素沉著產(chǎn)生明顯的影響。研究發(fā)現(xiàn)，很多因素能夠影響樹突的形成。Scott等研究發(fā)現(xiàn)，Rho家族小GTP酶，尤其是Rac1和RhoA在黑素細(xì)胞樹突形成方面起重要作用，其中Rac1起著促進樹突形成與延伸的作用，而RhoA則具有相反的作用。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，UVB照射可以通過調(diào)控樹突形成相關(guān)因子Rac1和RhoA的表達明顯

3、促進黑素細(xì)胞樹突的形成和延長，但是，UVB照射調(diào)控Rac1和RhoA表達的機制尚不清楚。
　　近年來，環(huán)氧合酶(cyclooxygenase，COX)在腫瘤的形成和發(fā)展中的作用成為人們關(guān)注的熱點。有研究顯示，COX-2抑制劑能抑制αvβ3調(diào)節(jié)的Cdc42/Rac1依賴的內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，并且，COX-2特異性抑制劑NS-398能夠使腫瘤細(xì)胞絲狀偽足消失及細(xì)胞侵襲能力下降，表明COX-2和Cdc42/Rac1都是NSAIDs引起細(xì)胞絲

4、狀偽足消失和體外侵襲能力下降的重要分子。這些研究提示環(huán)氧合酶與樹突的形成可能具有一定的關(guān)系。
　　因此，我們通過檢測UVB照射后黑素細(xì)胞COX水平的變化及觀察抑制COX活性對黑素細(xì)胞樹突形態(tài)及Rac1、RhoA的影響，深入探討環(huán)氧合酶在UVB照射誘導(dǎo)黑素細(xì)胞樹突形成中的作用及機制，為闡明UVB照射后色素沉著的發(fā)生機制以及防止提供新思路和新策略。
　　實驗方法：
　　本研究采用永生化的人表皮黑素細(xì)胞系PIG1，常規(guī)培養(yǎng)后

5、分為5組，分別為：
　?、賹φ战M；
　?、?00mJ/㎝ 2UVB照射組；
　?、?00mJ/㎝ 2UVB照射+ASA；
　　④100mJ/㎝ 2UVB照射+NS-398；
　　⑤100mJ/㎝ 2UVB照射+SC-560。
　　首先，應(yīng)用Western blot和RT-PCR檢測UVB照射對黑素細(xì)胞中COX-1、COX-2表達的影響；然后，顯微鏡下觀察不同處理對黑素細(xì)胞樹突形態(tài)的影響；最后，提取蛋白

6、和RNA應(yīng)用Western blot和PT-PCR方法檢測不同處理對黑素細(xì)胞Rac1和RhoA表達的影響。
　　實驗結(jié)果：
　　1．100mJ/㎝ 2UVB照射后COX-1和COX-2 mRNA及蛋白的表達均明顯增高；
　　2．100μmol/LASA及30μmol/LNS-398均可以抑制UVB照射誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞系PIG1樹突的形成和延長，而10μmol/LSC-560對UVB照射誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞系PIG1樹突的形

7、成和延長沒有明顯的抑制作用；
　　3．ASA濃度在50～150μmol/L內(nèi)時，可翻轉(zhuǎn)UVB照射引起的人黑素細(xì)胞系PIG1中Rac1的高表達以及RhoA的低表達，并呈劑量依賴關(guān)系；100μmol/LASA和30μmol/LNS-398均可以抑制UVB照射誘導(dǎo)的人黑素細(xì)胞系PIG1樹突形態(tài)相關(guān)分子Rac-1的高表達及RhoA的低表達,但SC-560并沒有類似效果。
　　結(jié)論：
　　1．一定劑量UVB照射可促進黑素細(xì)胞表達