樹突狀細(xì)胞在高壓氧治療早期膿毒癥中作用機(jī)制的研究.pdf

1、膿毒癥是由各種致病性微生物（包括細(xì)菌、病毒、真菌等）侵入人體而引起的具有損傷性的激烈全身炎癥反應(yīng)(SIRS)。膿毒癥早期，大量促炎因子爆發(fā)，造成機(jī)體自身免疫系統(tǒng)損傷。因此，各種治療手段都致力于下調(diào)炎性細(xì)胞因子的表達(dá)。高壓氧作為一種輔助的疾病治療手段已被臨床廣泛應(yīng)用。在先天性免疫細(xì)胞中，樹突狀細(xì)胞(DCs)是機(jī)體最重要的抗原呈遞細(xì)胞，是連接先天性和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)的橋梁。脾臟作為機(jī)體最大、DCs數(shù)量最多的免疫器官，脾臟DCs的變化，必然對(duì)機(jī)

2、體免疫系統(tǒng)起到重要作用。
　　實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.探索膿毒癥早期給予高壓氧治療對(duì)于小鼠生存率的影響;2.分析高壓氧治療后膿毒癥小鼠外周血細(xì)胞炎性因子的變化;3.通過流式細(xì)胞分析檢測(cè)脾臟DCs數(shù)量變化及表面表型變化。
　　實(shí)驗(yàn)方法:1.實(shí)驗(yàn)分組及模型的制備:選用SPF級(jí)雄性C57BL/6小鼠，隨機(jī)分為四組。A組(NS+Air)、B組(Zym+Air)、C組(NS+HBO)、D組(Zym+HBO)。B組和D組給予腹腔注射酵母多糖，A組

3、和C組小鼠注射等量的生理鹽水，C組和D組分別于注射后4h和11h后給予高壓氧干預(yù)2小時(shí)。2.腹腔注射酵母多糖18h后，眼球取血，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)小鼠外周血炎性因子IL-1β、IL-12、IL-10含量變化;3.采用免疫磁珠法分離脾臟DCs，經(jīng)流式細(xì)胞分析DCs表面特異性表型MHC-Ⅱ、CD80、CD86、PD-1、PD-L1表達(dá)水平的變化。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±

4、標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果:1.小鼠腹腔注射酵母多糖4h后小鼠出現(xiàn)如活動(dòng)減少、嗜睡、結(jié)膜炎、腹瀉等一系列膿毒癥表現(xiàn)，認(rèn)為造模成功。2.實(shí)驗(yàn)18h后，促炎因子IL-1β、IL-12在B組(Zym+ Air)和D組(Zym+HBO)明顯升高，與A組(NS+Air)和C組(NS+HBO)比較差異，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。而B組(Zym+Air)水平明顯高于D組(

5、Zym+HBO)，兩者之間比較存在顯著差異(P＜0.01)。抑炎因子IL-10在B組(Zym+ Air)和D組(Zym+HBO)與A組(NS+ Air)和C組(NS+HBO)比較明顯升高(P＜0.01)，在D組(Zym+HBO)升高更明顯(P＜0.01)。3.小鼠脾臟DCs經(jīng)過磁珠分選后純度可達(dá)95％，細(xì)胞存活率達(dá)95％以上。DCs表面表達(dá)MHC-Ⅱ在B組(Zym+ Air)、C組(NS+HBO)、D組(Zym+HBO)與A組(NS+

6、Air)比較均有明顯差異(P＜0.05)，B組(Zym+ Air)組表達(dá)MHC-Ⅱ水平下降更明顯(P＜0.01)。D組(Zym+HBO)表達(dá)MHC-Ⅱ較B組(Zym+ Air)升高，與B組(Zym+ Air)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。C組(NS+HBO)與A組(NS+ Air)比較MHC-Ⅱ表達(dá)也存在顯著性差異(P＜0.05)。DCs表面表達(dá)CD80在B組(Zym+ Air)與其他三組比較顯著增高(P＜0.01)，D組(Zym+H

7、BO)恢復(fù)至正常表達(dá)水平，與B組(Zym+ Air)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。B組(Zym+ Air) DCs表面表達(dá)CD86與A組(NS+ Air)和C組(NS+HBO)比較明顯升高(P＜0.01)，D組與B組(Zym+ Air)比較有所升高，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DCs表面表達(dá)共抑制分子PD-1，B組（Zym+空氣）與其他三組比較明顯升高(P＜0.05)。D組(Zym+ Air)表達(dá)PD-1與B組(Zym+HBO)比較明顯減少(P＜

8、0.05)，與A組(NS+ Air)和C組(NS+HBO)無明顯差異。C組(NS+HBO)表達(dá)水平略升高，但與A組(NS+ Air)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DCs表面表達(dá)共抑制分子PD-L1，B組（Zym+空氣）表達(dá)水較其他三組平明顯升高(P＜0.01)。D組(Zym+HBO)與B組(Zym+ Air)比較明顯下調(diào)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，與A組(NS+ Air)和C組(NS+HBO)比較存在明顯差異(P＜0.05)。A組(NS+ A

9、ir)與C組(NS+HBO)無明顯差異。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)論:1.研究結(jié)果顯示，高壓氧治療明顯提高膿毒癥小鼠72h生存率。2.膿毒癥組小鼠早期以促炎因子分泌為主，但也有少量抑炎因子分泌。高壓氧治療可以抑制早期炎癥因子的釋放，從而減輕過度炎癥過度激活造成機(jī)體的免疫損傷。同時(shí)也促進(jìn)抑炎因子的釋放，在一定程度上緩解機(jī)體免疫失衡狀態(tài)。3.膿毒癥早期給予高壓氧治療對(duì)正常小鼠DCs的成熟起到一定得抑制作用，而對(duì)于膿毒癥小鼠DCs卻能改善其成熟狀態(tài)。