漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞在慢性乙型肝炎發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf

1、目的：觀察漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoiddendriticcells，pDCs)在慢性乙型肝炎病人體內(nèi)的特點(diǎn)，分析其與臨床病程的關(guān)系，初步探討pDCs在乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)感染發(fā)病機(jī)制中的作用，為樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)疫苗的研制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：(1)應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)純化7例慢性乙型肝炎病人和4例健康人外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheralblo

2、odmononuclearcells,PBMCs)中的pDCs，體外加入CpGODN2216或CpGODN2006刺激劑共培養(yǎng)24h后，應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析刺激前后pDCs表面共刺激分子的表達(dá)情況，同時(shí)通過ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IFN-α，IL-12和IL-10的產(chǎn)生情況，從而初步鑒定pDCs的免疫學(xué)特性。 (2)應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)20例慢性乙型肝炎病人和15例健康人外周血DC亞群和淋巴細(xì)胞亞群頻率，并使用CpGODN2

3、216刺激其PBMCs，然后利用ELISA技術(shù)檢測(cè)培養(yǎng)上清中IFN-α含量，分析HBV慢性感染病人外周血pDCs頻率、數(shù)量和功能的變化及其與臨床病程的關(guān)系。 (3)應(yīng)用免疫組化技術(shù)和流式細(xì)胞分析技術(shù)等觀察11例慢性重型乙型肝炎病人和4例健康人外周血和肝臟浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(Liverinfiltratinglymphocytes，LILs)中pDCs的頻率、數(shù)量和功能的差異。 結(jié)果：(1)應(yīng)用免疫磁珠分選技術(shù)可以得到純度大于9

4、5％的pDCs。CpGODN2216可以刺激純化的pDCs產(chǎn)生大量的IFN-α，而CpGODN2006刺激pDCs高表達(dá)共刺激分子CD80、CD86、CD40和CD83；與健康人比較，CpGODN2216刺激慢性乙肝病人純化的pDCs產(chǎn)生的IFN-α的能力明顯降低。 (2)與健康人比較，慢性乙型肝炎病人外周血中pDCs和NK細(xì)胞頻率明顯下降，并且CpGODN2216刺激PBMCs產(chǎn)生IFN-α的能力也顯著降低；相關(guān)性分析表明，慢

5、性乙肝病人pDCs頻率與ALT呈明顯負(fù)相關(guān)，但與血漿病毒載量無明顯相關(guān)。 (3)慢性重型乙型肝炎病人LILs中pDCs百分含量明顯高于PBMCs，免疫組化檢測(cè)也顯示慢性重型乙型肝炎病人肝組織中pDCs浸潤(rùn)顯著增加。雖然慢性重型乙型肝炎病人LILs中pDCs百分含量較PBMCs為高，但LILs經(jīng)過CpGODN刺激后產(chǎn)生IFN-α量卻明顯低于刺激PBMCs后的產(chǎn)生量。 結(jié)論：pDCs是人體最主要的IFN-α產(chǎn)生細(xì)胞，CpGO