腫瘤翻譯調(diào)控蛋白(TCTP)對結(jié)腸癌細胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文腫瘤翻譯調(diào)控蛋白（TCTP）對結(jié)腸癌細胞LoVo的生物學(xué)特性影響及安全型慢病毒載體構(gòu)建探索姓名：馬強申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：免疫學(xué)指導(dǎo)教師：李明20090410中文摘要安全性沒有很好解決，如對導(dǎo)入基因的控制、外緣基因及基因載體本身整合到宿主染色體帶來的一系列問題等；②用于大腸癌理想載體的選擇應(yīng)具有安全性、高效性、靶向性、大容量性和可控性等特點，目前還難以找到可運用到理想的臨床要求載體：③缺乏足夠的基因治療靶序列，

2、大腸癌的發(fā)生是一種多基因水平調(diào)控的失控所致單獨基因治療效果差。由此進一步深入研究大腸癌的發(fā)病機制，尋找確定更多更有效的治療靶基因，制備安全高效的基因治療載體是大腸癌基因治療中迫切需要解決的問題。本文第一部分著重研究腫瘤翻譯調(diào)控蛋白(TCTP)對高轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌細胞株的細胞生物學(xué)影響以及相關(guān)信號傳導(dǎo)通路的研究。第二部分著重研究新型基因治療用慢病毒載體生產(chǎn)體系的改進和優(yōu)化。第一部分通過構(gòu)建靶向TCTP基因的shRNA質(zhì)粒表達載體，下調(diào)TCTP

3、在LoVo細胞中的表達。通過CCK一8實驗檢測LoVo細胞的增殖速度，粘附實驗檢測LoVo細胞對ECM的粘附能力，趨化實驗和劃痕實驗檢測LoVo細胞的運動能力，侵襲實驗檢澳lJLoVo細胞對于ECM的分解穿透能力，EMSA以及熒光素酶實驗檢i貝OTCTP下調(diào)后對于NFrB活性的影響。通過成瘤實驗檢測TCTP下調(diào)對于LoVo細胞成瘤能力的影響，轉(zhuǎn)移模型實驗檢測LoVo細胞體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移能力的影響，通過2D電泳和質(zhì)譜分析鑒定與TCTP相關(guān)蛋白，

4、并初步評價TCTP在正常人以及病人血清中的含量。構(gòu)建shRNA質(zhì)粒表達載體，質(zhì)粒酶切以及測序鑒定表明質(zhì)粒構(gòu)建成功。下調(diào)TCTP在LoVo細胞中的表達，經(jīng)熒光顯微鏡觀察各組LoVo細胞均出現(xiàn)綠色報告熒光，RT。PCR，westernblotting，qRTPCR分析鑒定TCTP的表達下調(diào)分別達至t]82％、89％、73％。TCTP下調(diào)能夠體外減慢LoVo細胞的增殖速度，shRNATCTP，shRNATCTPLoVoparental組分別鋪