表達(dá)TIPE2腺病毒載體的構(gòu)建及其對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：結(jié)腸癌的發(fā)生與結(jié)腸慢性炎癥密切相關(guān)。TIPE2(Tumor necrosis factor-α-inducedprotein8-like2)是一種炎癥和免疫平衡的調(diào)節(jié)因子。本實驗旨在構(gòu)建表達(dá)TIPE2的腺病毒載體,并初步觀察其對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響。
　　方法：HEK293細(xì)胞中Trizol法提取RNA、逆轉(zhuǎn)錄、Primer star程序擴(kuò)增出目的片段TIPE2-cDNA后,將TIPE2-cDNA定向克隆至轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pShut

2、tle-CMV多克隆位點(diǎn),然后與病毒骨架質(zhì)粒pAdc68重組,在HEK293細(xì)胞中包裝成完整病毒并復(fù)制擴(kuò)增、純化,獲得表達(dá) TIPE2的重組腺病毒載體,命名為 Adc68-TIPE2。實時熒光定量PCR及Western blot檢測病毒感染后TIPE2在結(jié)腸癌細(xì)胞系HT29及SW620中的表達(dá),MTT法檢測TIPE2對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的影響。
　　結(jié)果：重組腺病毒載體Adc68-TIPE2構(gòu)建成功。病毒感染后TIPE2可在結(jié)腸癌細(xì)胞

3、系HT29及SW620中高效表達(dá)。以不同濃度Adc68-TIPE2(分別為108vp/ml,109vp/ml,1010vp/ml)感染HT29及SW620細(xì)胞48小時后,HT29細(xì)胞的增值率分別為93％,71％,14％,與空載體相比病毒濃度為109vp/ml、1010vp/ml差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),病毒濃度為108vp/ml差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);SW620增殖率分別為89％,53％,10％,與空載體相比病毒濃度為