硫酸頭孢喹肟在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)和殘留初步研究.pdf

1、頭孢喹肟(cefquinome，CEF)是動(dòng)物專(zhuān)用的第一個(gè)第四代頭孢菌素，具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)，吸收迅速，安全，高效等特點(diǎn)，臨床上取得了良好的效果，在我國(guó)獸醫(yī)臨床上具有廣闊的應(yīng)用前景。本課題研究了硫酸頭孢喹肟的含量測(cè)定及其在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)與殘留，具體研究?jī)?nèi)容如下： 1.HPLC法測(cè)定硫酸頭孢喹肟含量 建立了測(cè)定硫酸頭孢喹肟含量的高效液相色譜法。采用C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5μm)，稱(chēng)取一水合高氯酸鈉

2、3.45 g溶于1000 mL水中，加磷酸12 mL，用三乙胺調(diào)至pH3.6，將此溶液與乙腈按90：10的比例混合作為流動(dòng)相，流速為0.8 mL·min-1，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，進(jìn)樣量20μL，柱溫30℃。頭孢喹肟濃度在0.06 mgml/L～0.14 mgml/L時(shí)，其峰面積與濃度的線(xiàn)性關(guān)系良好，線(xiàn)性方程為A=42382 C-162477(r=0.9999)，檢測(cè)限為0.005μgml/L；日內(nèi)、日間精密度變異系數(shù)分別為0.4

3、3％、0.53％；重復(fù)性變異系數(shù)為0.93％，供試品在流動(dòng)相中穩(wěn)定性良好，8小時(shí)內(nèi)變異系數(shù)為0.86％。結(jié)果表明，本方法操作簡(jiǎn)便，分析快速，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于硫酸頭孢喹肟原料藥的含量測(cè)定。測(cè)得2.5％硫酸頭孢喹肟注射液的含量為標(biāo)識(shí)量的99.3％，符合進(jìn)口獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 2.硫酸頭孢喹肟中四種有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定 建立了氣相色譜測(cè)定硫酸頭孢喹肟中乙醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯等4種有機(jī)溶劑殘留的方法。采用DB-624石英毛細(xì)管柱

4、，F(xiàn)ID檢測(cè)器，程序升溫：40℃(保持10 min)～220℃(保持5min)，升溫速率為30℃·min-1，進(jìn)樣口溫度為220℃，檢測(cè)器溫度為230℃，流速：5mL·min-1，分流比為20：1.結(jié)果顯示：硫酸頭孢喹肟原料藥中乙醇、丙酮、二氯甲烷、甲苯在所考察的濃度范圍內(nèi)與峰面積比值呈良好的線(xiàn)性關(guān)系(r=0.9994～0.9998)，檢測(cè)限分別為1.67μgml/L，1.89μgml/L，2.56μgml/L，2.02μgml/L(S

5、/N=5)，平均加樣回收率97.69％～99.42％，RSD均小于5％(n=3)。本試驗(yàn)建立的色譜方法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于硫酸頭孢喹肟中有機(jī)溶劑殘留量的測(cè)定，測(cè)得硫酸頭孢喹肟原料藥中有機(jī)溶劑均未超標(biāo)，符合標(biāo)準(zhǔn)。 3.硫酸頭孢喹肟在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)初步研究 建立了豬血漿中頭孢喹肟的SPE- HPLC測(cè)定方法，對(duì)頭孢喹肟在豬體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)特征進(jìn)行初步研究。選用健康豬6頭，進(jìn)行單次肌肉注射推薦治療劑量(2mg·kg-

6、1)的自制2.5％硫酸頭孢喹肟注射液。血漿藥物提取后經(jīng)SPE柱凈化，凈化液進(jìn)行HPLC分析。色譜條件為C18反相柱，流動(dòng)相采用高氯酸鈉-瞵酸-三乙胺緩沖液(pH3.6)：乙腈(V：V，90：10)。藥-時(shí)數(shù)據(jù)用3P97藥動(dòng)軟件進(jìn)行分析。結(jié)果表明，頭孢喹肟在0.05～25μgml/L內(nèi)線(xiàn)性范圍良好，r=0.9993，最低檢測(cè)限為0.05μgml/L。頭孢喹諾高、中、低(25、5、0.5μgml/L)3種濃度的血漿樣品，平均回收率分別為(9

7、0.67±0.84)％，(94.06±1.26)％，(91.64±2.03)％，其日內(nèi)變異系數(shù)分別為0.94％、0.63％、1.96％，日間變異系數(shù)為0.48％、1.28％、2.22％.藥動(dòng)學(xué)數(shù)據(jù)分析顯示：頭孢喹肟的藥時(shí)數(shù)據(jù)適合一級(jí)吸收二室模型，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為T(mén)1/2α：(0.67±0.11)h，T1/2β：(2.28±0.49)h，T1/2Ka：(0.40±0.12)h，CL/F(s)：(0.27±0.03)L·kg-1·h，V/F

8、(c)：(0.40±0.10)μgml/L，Tmax：(0.80±0.05)h，Cmax：(2.44±0.24)μgml/L，AUC：(7.28±1.11)μg·mL-1·h。結(jié)果提示，健康豬單次肌注硫酸頭孢喹肟后吸收迅速，持效時(shí)間較長(zhǎng)，臨床用藥18 h后仍能維持對(duì)常見(jiàn)病原菌的有效血藥濃度，建議用藥方案：2mg·kg-1，1日1次。此方法可靠、快速、靈敏度高，該法的建立可為今后同類(lèi)藥物的研究提供基礎(chǔ)。 4.硫酸頭孢喹肟在豬體內(nèi)的

9、殘留初步研究 建立了頭孢喹肟在仔豬組織內(nèi)殘留的高效液相色譜分析法。以2 mg·kg-1的劑量于股四頭肌肌肉注射2.5％硫酸頭孢喹肟注射液，連續(xù)用藥五天，于最后一次給藥后不同時(shí)間點(diǎn)采樣，取肌肉、肝臟、腎臟、肺臟、脂肪加皮膚等組織。樣品經(jīng)勻漿、提取后轉(zhuǎn)入SPE柱凈化，濃縮后進(jìn)HPLC進(jìn)行色譜分析.本試驗(yàn)條件下，各組織濃度在20μg·kg-1～500μg·kg-1范圍內(nèi)時(shí)，線(xiàn)性關(guān)系良好，最低定量限為20μg·kg-1。將頭孢喹肟以20

10、、100、500μg·kg-1分別添加到空白組織中，測(cè)得肌肉、肝臟、腎臟、肺臟、脂肪+皮膚組織中頭孢喹肟回收率均在78％以上，平均回收率分別為81.57％、82.42％、81.29％、83.97％、78.80％。日內(nèi)變異RSD％在1.82～6.25％之間，日間變異RSD％在1.11～6.35％之間。殘留消除研究結(jié)果顯示：停藥后各組織中頭孢喹肟濃度逐漸下降，最后一次注射后的第4天，肺臟、脂肪+皮膚中已經(jīng)檢測(cè)不到頭孢喹肟，最后一次注射后的第